Bộ RT-qPCR trực tiếp II
Bộ mô tả:
◮Direct RT-qPCR Kit, sử dụng Foreasy Reverse Transcriptase và Foreasy HS Taq DNA Polymerase do Foregene phát triển, với bộ đệm phản ứng độc đáo, làm cho bộ này có khả năng tương thích và kháng cự mạnh, đồng thời có thể kiểm tra phản ứng trực tiếp bằng cách sử dụng hệ thống Ly giải Foregene làm khuôn mẫu.Bộ này có thể áp dụng cho bộ phát hiện axit nucleic COVID-19 và phát triển bộ phát hiện axit nucleic của vi khuẩn gây bệnh khác.
Sự miêu tả
Direct RT-qPCR Kit cung cấp bộ đệm RT-qPCR được đóng gói riêng, hiệu quả cao Foreasy HS Taq DNA Polymerasevà Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV),làm cho nó thuận tiện cho việc tạo các bộ công cụ phụ trợ và điều chỉnh hệ thống, trong vòng xác minh đơn giản.
Direct RT-qPCR Kit, sử dụng Foreasy Reverse Transcriptase và Foreasy HS Taq DNA Polymerase do Foregene phát triển, với bộ đệm phản ứng độc đáo, làm cho bộ này có khả năng tương thích và kháng cự mạnh, đồng thời có thể kiểm tra phản ứng trực tiếp bằng cách sử dụng hệ thống Ly giải Foregene làm khuôn mẫu.Bộ này có thể áp dụng cho bộ phát hiện axit nucleic COVID-19 và phát triển bộ phát hiện axit nucleic của vi khuẩn gây bệnh khác.
Bộ kit này có thể trực tiếp là thành phần của sản phẩm IVD, sử dụng dễ dàng và nhanh chóng.Nó chỉ cần xác minh dễ dàng, không cần phát triển lại.
thông số kỹ thuật
500T, 50.000T
thành phần bộ
| Nội dung lắp ráp (Hệ thống phản ứng 20 μL) | IM-05111-02 | IM-05112-02 |
| 500 tấn | 50.000 tấn | |
| dễ dàng Rphiên mã vĩnh cửu (200 U/μL) | 50 µL×1 | 1mL×5 |
| Foreasy HS Taq DNA polymerase (5 người/μL) | 100 μl×1 | 1mL×10 |
| 2× RT-qPCR trực tiếpĐệm | 1ml ×5 | 500 mL ×1 |
| Chỉ dẫn | 1 | 1 |
Các bước vận hành
A: Chuẩn bị tiêu bản và thuốc thử
1. Chuẩn bị mẫu RNA đã chuẩn bị sẵn (Khuyến nghị sử dụng bộ công cụ sê-ri Foregene Total RNA Isolation Kit để chiết xuất và tinh chế mẫu RNA) hoặc sản phẩm bẻ khóa mẫu (Khuyến nghị sử dụng hệ thống Foregene Lysis), mồi cụ thể (10 μM) và các vật tư tiêu hao, dụng cụ có liên quan khác.
2. Cho 2× Direct RT-qPCR Buffer, RNase-Free ddH2O và 20× ROX Reference Dye (nếu cần) vào hộp cùng với đá, làm cho chúng tan chảy tự nhiên và trộn nhẹ nhàng.
B: Chuẩn bị hệ thống RT-qPCR
Lấy một nửa thể tích dung dịch đệm phản ứng của hệ thống phản ứng (ví dụ: nếu thể tích của hệ thống là 20 μL thì cần lấy 10 μL 2× Direct RT-qPCR Buffer). Vìlượng enzim tương ứng, chúng tôi đề nghị rằngHệ thống phản ứng M-MLV：10-30 U/20 μL,taqADN pôlimeraza：Hệ thống phản ứng 1-2 U/20 μLđây là gợi ý của chúng tôi, bạn nên kiểm tra và điều chỉnh nó), thêm mẫu RNA, đoạn mồi và mẫu dò cụ thể, đồng thời thêm ddH không chứa RNase2O đến 20 μL.Quá trình chuẩn bị cụ thể của hệ thống phản ứng RT-qPCR có thể tham khảo trong bảng 1 sau đây.
Bảng 1: Chuẩn bị hệ thống RT-qPCR
| Thành phần | Âm lượng | Nồng độ cuối cùng |
| Bộ đệm RT-qPCR trực tiếp 2× | 10 μL | 1× |
| Foreasy Reverse Transcriptase (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq DNA polymerase | 1-2 U | |
| Sơn lót chuyển tiếp (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Đảo ngược mồi (10 μM) | 0,8 μL | 50-900nM |
| Đầu dò (4 M) | 1μL | 200nM |
| Mẫu (RNA hoặc Lysate) | XµL | |
| Thuốc nhuộm tham chiếu ROX 20× | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X)μL | |
| Tổng khối lượng | 20 μL |
Chú ý: Forward Primer và Reverse Primer là những primer đặc hiệu của gen mục tiêu.Hệ thống của qPCR có thể được điều chỉnh theo các mô hình PCR và thử nghiệm thực tế.Chúng tôi khuyên dùng 400nM cho nồng độ cuối cùng của hầu hết các mồi.Vui lòng điều chỉnh thể tích mồi và mẫu dò cụ thể theo nồng độ đã chuẩn bị và nồng độ cuối cùng được khuyến nghị.
1*: Chọn nồng độ cuối cùng phù hợp của ROX Reference Dye theo các dụng cụ PCR định lượng khác nhau.Nồng độ ROX Reference Dye tối ưu của các máy PCR định lượng phổ biến được trình bày trong bảng sau:
| Dụng cụ PCR định lượng | Nồng độ cuối cùng của ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Bước Một,vân vân. | 1× (ví dụ: thêm 1μl 20×ROX Reference Dye trong hệ thống phản ứng 20 μL) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P và Mx4000, v.v. | 0,5× (ví dụ: thêm 0,5μl 20×ROX Reference Dye trong hệ thống phản ứng 20 μL) |
| Máy Roche PCR, máy Bio-Rad PCR, máy PCR định lượng Eppendorf, v.v. | Không có ROX Reference Dye |
Lưu trữ và thời hạn sử dụng
Bộ này nên được bảo quản ở -20 ± 5℃.Nó nên được bảo quản ngay trong tủ lạnh điều nhiệt -20℃.Thời hạn hiệu lực là 2 năm nếu nó được lưu trữ trong điều kiện phù hợp.
