Cell Total RNA Isolation Kit Tổng RNA Isolation Kits từ tế bào
Bộ mô tả:
Có thể thu được RNA tổng số chất lượng cao và tinh khiết cao từ các tế bào nuôi cấy khác nhau trong 11 phút.
RNase miễn phí
Hoạt động ở nhiệt độ phòng (15-25℃)
Với cột làm sạch DNA
Năng suất RNA cao
Nhanh chóng: Kết thúc khai thác trong 11 phút
An toàn:Không có hóa chất hữu cơ
Sự miêu tả
Bộ kit này sử dụng cột quay và công thức do Foregene phát triển, có thể trích xuất hiệu quả RNA tổng số có độ tinh khiết cao và chất lượng cao từ các tế bào được nuôi cấy trong các đĩa 96, 24, 12 và 6 giếng.
Bộ này cung cấp một Cột làm sạch DNA hiệu quả, cột này có thể dễ dàng tách phần nổi phía trên và phần ly giải tế bào, liên kết và loại bỏ DNA bộ gen.Các hoạt động là đơn giản và tiết kiệm thời gian.
Tanh ấy Cột chỉ RNA có thể liên kết hiệu quả RNA với một công thức độc đáo.Một số lượng lớn các mẫu có thể được xử lý đồng thời.
thành phần bộ
| thành phần bộ | LẠI-03111 | LẠI-03114 |
| 50T | 200 tấn | |
| Bộ đệm cRL1* | 25mL | 100mL |
| Bộ đệm cRL2 | 15mL | 60mL |
| Đệm RW1* | 25mL | 100mL |
| đệm RW2 | 24mL | 96mL |
| ddH2O không chứa RNase | 10mL | 40mL |
| Cột chỉ RNA | 50 | 200 |
| Cột làm sạch DNA | 50 | 200 |
| Chỉ dẫn | 1 | 1 |
* Vui lòng đeo găng tay và thực hiện các biện pháp bảo vệ trong quá trình vận hành vì Buffer cRL1 và Buffer RW1 có chứa muối chaotropic gây kích ứng.
Tính năng & ưu điểm
■ Toàn bộ quy trình được vận hành ở nhiệt độ phòng (15-25℃), không ngâm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.
■ Toàn bộ bộ sản phẩm đều không chứa RNase, không cần lo lắng về sự phân hủy RNA.
■ Cột Làm sạch DNA liên kết đặc biệt với DNA, do đó bộ kit này có thể loại bỏ nhiễm bẩn DNA bộ gen mà không cần bổ sung thêm DNase.
■ Năng suất RNA cao: Cột chỉ RNA và công thức độc đáo có thể tinh sạch RNA một cách hiệu quả.
■ Tốc độ nhanh: dễ vận hành và có thể hoàn thành trong 11 phút.
■ An toàn: Không cần thuốc thử hữu cơ.
■ Chất lượng cao: RNA tinh sạch có độ tinh khiết cao, không chứa protein và các tạp chất khác, đáp ứng được nhiều thí nghiệm tiếp theo.
ứng dụng bộ
Nó phù hợp để chiết xuất và tinh chế RNA tổng số từ các tế bào nuôi cấy trong các đĩa 96, 24, 12 và 6 giếng.
quy trình làm việc
Biểu đồ
Sơ đồ pin gel agarose của Cell Total RNA Isolation Kit đã xử lý số lượng tế bào khác nhau ở trên, rửa giải thể tích 20μl, lấy 2μl RNA tổng số tinh khiết 1%.
Bảo quản và thời hạn sử dụng
Bộ sản phẩm có thể được bảo quản trong 12 tháng ở nhiệt độ phòng (15–25 ℃) hoặc 2–8 ℃ trong thời gian dài hơn (24 tháng).
Bộ đệm cRL1 có thể được bảo quản ở 4 ℃ trong 1 tháng sau khi thêm 2-hydroxy-1-ethanethiol (tùy chọn).
RNA không được chiết xuất hoặc năng suất RNA thấp
Thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi, chẳng hạn như: hàm lượng RNA mẫu mô, phương pháp vận hành, thể tích rửa giải, v.v.
1. Quá trình ly tâm trong bể nước đá hoặc đông lạnh (4 °C) được thực hiện trong quá trình vận hành.
Khuyến nghị: Vận hành ở nhiệt độ phòng (15-25°C) trong suốt quá trình, không ngâm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.
2. Bảo quản mẫu không đúng cách hoặc quá thời gian bảo quản mẫu.
Khuyến nghị: Bảo quản mẫu ở -80 °C hoặc làm đông lạnh trong nitơ lỏng và tránh sử dụng nhiều lần làm đông lạnh-rã đông;cố gắng sử dụng mô tươi hoặc tế bào nuôi cấy để tách chiết RNA.
3. Ly giải mẫu không đủ.
Khuyến nghị: Khi đồng nhất hóa mô, hãy đảm bảo rằng mô được đồng nhất hóa đầy đủ và các tế bào mô được phân chia đủ để giải thích sự giải phóng RNA.
4. Dung dịch rửa giải không được thêm chính xác.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng ddH không chứa RNase2O được thêm từng giọt vào giữa màng cột tinh chế.
5. Thể tích chính xác của etanol tuyệt đối đã không được thêm vào Dung dịch đệm RL2 hoặc Dung dịch đệm RW2.
Khuyến nghị: Làm theo hướng dẫn, thêm đúng lượng ethanol tuyệt đối vào Buffer RL2 và Buffer RW2 và trộn đều trước khi sử dụng bộ kit.
6. Liều lượng mẫu mô không phù hợp.
Khuyến nghị: Sử dụng 10-20 mg mô hoặc (1-5) × 106tế bào trên mỗi 500 μl đệm RL1, vì việc sử dụng quá nhiều mô có thể dẫn đến giảm chiết xuất RNA.
7. Thể tích rửa giải không đúng hoặc rửa giải không đầy đủ.
Khuyến nghị: Thể tích rửa giải của cột tinh chế là 50-200 μl;nếu hiệu quả rửa giải không đạt yêu cầu, nên kéo dài thời gian đặt ở nhiệt độ phòng sau khi thêm ddH không chứa RNase đã được làm nóng trước2O, ví dụ như trong 5-10 phút.
8. Cột tinh chế có cặn ethanol sau khi rửa Buffer RW2.
Khuyến nghị: Nếu có dư lượng ethanol sau khi rửa Buffer RW2, hãy ly tâm ống rỗng trong 1 phút, thời gian cho quá trình ly tâm ống rỗng có thể tăng lên 2 phút hoặc cột tinh chế có thể được đặt ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để loại bỏ hoàn toàn lượng ethanol còn lại.
RNA tinh khiết bị thoái hóa
Chất lượng của RNA tinh khiết có liên quan đến các yếu tố như bảo quản mẫu, nhiễm RNase và thao tác, v.v.
1. Mẫu mô không được lưu giữ kịp thời.
Khuyến nghị: Nếu các mẫu mô hoặc tế bào không được sử dụng kịp thời sau khi thu thập, hãy bảo quản lạnh ngay lập tức ở -80 °C hoặc nitơ lỏng.Để chiết xuất RNA, hãy sử dụng mẫu mô hoặc tế bào mới được lấy bất cứ khi nào có thể.
2. Làm đông-rã đông lặp đi lặp lại các mẫu mô.
Khuyến nghị: Khi lưu trữ các mẫu mô, tốt nhất nên cắt chúng thành các mảnh nhỏ để bảo quản và loại bỏ một trong các mảnh đó khi sử dụng chúng để tránh mẫu bị đóng băng nhiều lần và sự phân hủy của RNA.
3. RNase được giới thiệu hoặc không đeo găng tay, mặt nạ dùng một lần, v.v. trong quá trình hoạt động.
Khuyến nghị: Các thí nghiệm tách chiết RNA được thực hiện tốt nhất trong các phòng thao tác RNA riêng biệt và bàn được dọn sạch trước khi thực hiện thí nghiệm.
Đeo găng tay và khẩu trang dùng một lần trong suốt quá trình thí nghiệm để giảm thiểu sự phân hủy RNA do đưa RNase vào.
4. Thuốc thử bị nhiễm RNase trong quá trình sử dụng.
Khuyến nghị: Thay thế bằng Bộ tách RNA tổng số động vật mới cho các thí nghiệm liên quan.
5. Các ống ly tâm, đầu tip, v.v. được sử dụng trong thao tác RNA bị nhiễm RNase.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng các ống ly tâm, đầu tip, pipet, v.v. được sử dụng trong chiết xuất RNA đều không chứa RNase.
RNA thu được tinh khiết ảnh hưởng đến các thí nghiệm xuôi dòng
RNA được tinh chế bằng cột tinh chế, nếu hàm lượng ion muối, protein quá lớn sẽ ảnh hưởng đến thí nghiệm xuôi dòng, chẳng hạn như: phiên mã ngược, Northern Blot et al.
1. RNA rửa giải có dư lượng ion muối.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng lượng etanol chính xác đã được thêm vào Bộ đệm RW2 và thực hiện 2 lần rửa cột tinh chế ở tốc độ ly tâm được chỉ định cho hoạt động;nếu có bất kỳ dư lượng ion muối nào, hãy để cột tinh chế trong Bộ đệm RW2 trong 5 phút ở nhiệt độ phòng và thực hiện ly tâm để tối đa hóa việc loại bỏ nhiễm bẩn muối.
2. Dư lượng ethanol trong RNA rửa giải.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng sau khi rửa dung dịch đệm RW2, hãy thực hiện thao tác ly tâm ống rỗng ở tốc độ ly tâm được chỉ định cho hoạt động, tăng thời gian của thao tác ly tâm ống rỗng lên 2 phút nếu vẫn còn cặn ethanol hoặc để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút
