Foreasy Taq DNA polymerase
Bộ mô tả:
◮Tính đặc hiệu cao: Enzyme có hoạt tính bắt đầu nóng nhất định.
◮Khuếch đại nhanh: 10 giây/kb.
◮Mẫu có khả năng thích ứng cao: có thể được sử dụng để khuếch đại hiệu quả GC Mẫu DNA khó khuếch đại khác nhau có giá trị cao.
◮Độ trung thực mạnh mẽ: Taq Enzyme thông thường gấp 6 lần.
◮Ổn định nhiệt mạnh: Nó có thể được đặt ở 37 ° C trong một tuần và duy trì hoạt động hơn 90%.
Sự miêu tả
Foreasy Taq DNA Polymerase là một enzyme Taq mới được thể hiện ở vi khuẩn kỹ thuật Escherichia coli bằng công nghệ tái tổ hợp gen.Bản thân enzyme này có hoạt tính khởi động nóng nhất định và có thể được sử dụng cho PCR và qPCR thông thường;nó có hoạt tính 5'→3' DNA polymerase và 5'→3' exonuclease, nhưng không có hoạt tính 3'→5' exonuclease.
thành phần bộ
| Thành phần | IM-01011 | IM-01012 | IM-01013 |
| Foreasy Taq DNA polymerase(5 U/μL) | 5000 U (1mL) | 50 KU (10 mL) | 500 KU (100 mL) |
| Bộ đệm phản ứng 2× Taq | 25mL ×5 | 250mL ×5 | 500mL ×25 |
Tính năng & ưu điểm
- Tính đặc hiệu cao: Enzim có hoạt tính khởi động nóng nhất định.
- Khuếch đại nhanh: 10 giây/kb .
- Mẫu có khả năng thích ứng cao: có thể được sử dụng để khuếch đại hiệu quả GC Mẫu DNA khó khuếch đại khác nhau có giá trị cao.
- Độ trung thực cao: gấp 6 lần Taq Enzyme thông thường.
- Ổn định nhiệt mạnh: Nó có thể được đặt ở 37 ° C trong một tuần và duy trì hơn 90% hoạt động
ứng dụng bộ
Nhiều hệ thống PCR/qPCR và hệ thống PCR trực tiếp
Khuếch đại PCR các đoạn DNA
dán nhãn DNA
xét nghiệm DNA
PCR đuôi A
Định nghĩa U
1U: Lượng enzyme cần thiết để kết hợp 10nmol deoxynucleotide vào chất không hòa tan trong axit bằng cách sử dụng DNA tinh trùng cá hồi đã hoạt hóa làm khuôn/mồi trong 30 phút ở 74°C.
Điều kiện phản ứng
| Nhiệt độ | Thời gian | Xe đạp |
| 37°C | 5 phút | 1 |
| 94°C | 5 phút | 1 |
| 94°C | 10 giây | 35 |
| 60°C | 10 giây | |
| 72°C | 20 giây/kb | |
| 72°C | 2 phút | 1 |
Kho
-20 ± 5 °C trong 2 năm hoặc ở -80 °C để lưu trữ lâu dài.
Không có tín hiệu khuếch đại
1.Taq DNA Polymerase trong bộ kit mất hoạt tính do bảo quản không đúng cách hoặc bộ kit hết hạn sử dụng.
Khuyến nghị: Xác nhận các điều kiện bảo quản của bộ;thêm lại một lượng Taq DNA Polymerase thích hợp vào hệ thống PCR hoặc mua Bộ công cụ PCR thời gian thực mới cho các thí nghiệm liên quan.
2. Có rất nhiều chất ức chế Taq DNA Polymerase trong khuôn mẫu DNA.
Đề xuất: Tinh chỉnh lại mẫu hoặc giảm lượng mẫu được sử dụng.
3.Nồng độ Mg2+ không phù hợp.
Khuyến nghị: Nồng độ Mg2+ của 2× Real PCR Mix mà chúng tôi cung cấp là 3,5mM.Tuy nhiên, đối với một số primer và template đặc biệt, nồng độ Mg2+ có thể cao hơn.Do đó, bạn có thể thêm trực tiếp MgCl2 để tối ưu hóa nồng độ Mg2+.Nên tăng Mg2+ 0,5mM mỗi lần để tối ưu.
4. Điều kiện khuếch đại PCR không phù hợp, trình tự mồi hoặc nồng độ không phù hợp.
Gợi ý: khẳng định trình tự mồi đúng và mồi không bị suy thoái;nếu tín hiệu khuếch đại không tốt, cố gắng giảm nhiệt độ ủ và điều chỉnh nồng độ mồi thích hợp.
5. Số lượng mẫu quá ít hoặc quá nhiều.
Khuyến nghị: Thực hiện pha loãng gradient tuyến tính hóa mẫu và chọn nồng độ mẫu có hiệu ứng PCR tốt nhất cho thí nghiệm PCR thời gian thực.
NTC có giá trị huỳnh quang quá cao
1. Nhiễm bẩn thuốc thử gây ra trong quá trình vận hành.
Khuyến nghị: Thay thế bằng thuốc thử mới cho các thí nghiệm Real Time PCR.
2. Sự nhiễm bẩn xảy ra trong quá trình chuẩn bị hệ thống phản ứng PCR.
Khuyến cáo: Thực hiện các biện pháp bảo vệ cần thiết trong quá trình thao tác như: đeo găng tay cao su, sử dụng đầu pipet có bộ lọc, v.v.
3. Các đoạn mồi bị suy giảm và sự xuống cấp của các đoạn mồi sẽ gây ra sự khuếch đại không đặc hiệu.
Đề xuất: Sử dụng điện di SDS-PAGE để phát hiện xem các đoạn mồi có bị phân hủy hay không và thay thế chúng bằng các đoạn mồi mới cho các thí nghiệm Real Time PCR.
Primer dimer hoặc khuếch đại không đặc hiệu
1.Nồng độ Mg2+ không phù hợp.
Khuyến nghị: Nồng độ Mg2+ của 2× Real PCR EasyTM Mix mà chúng tôi cung cấp là 3,5 mM.Tuy nhiên, đối với một số primer và template đặc biệt, nồng độ Mg2+ có thể cao hơn.Do đó, bạn có thể thêm trực tiếp MgCl2 để tối ưu hóa nồng độ Mg2+.Nên tăng Mg2+ 0,5mM mỗi lần để tối ưu.
2. Nhiệt độ ủ PCR quá thấp.
Gợi ý: Tăng nhiệt độ ủ PCR lên 1℃ hoặc 2℃ mỗi lần.
3.Sản phẩm PCR quá dài.
Khuyến nghị: Độ dài của sản phẩm Real Time PCR nên nằm trong khoảng 100-150bp, không quá 500bp.
4. Các đoạn mồi bị suy giảm và sự xuống cấp của các đoạn mồi sẽ dẫn đến sự xuất hiện của sự khuếch đại cụ thể.
Đề xuất: Sử dụng điện di SDS-PAGE để phát hiện xem các đoạn mồi có bị phân hủy hay không và thay thế chúng bằng các đoạn mồi mới cho các thí nghiệm Real Time PCR.
5. Hệ thống PCR không phù hợp hoặc hệ thống quá nhỏ.
Gợi ý: Hệ thống phản ứng PCR quá nhỏ sẽ làm giảm độ chính xác phát hiện.Tốt nhất là sử dụng hệ thống phản ứng được đề xuất bởi công cụ PCR định lượng để chạy lại thí nghiệm Real Time PCR.
Độ lặp lại kém của các giá trị định lượng
1. Máy bị trục trặc.
Gợi ý: Có thể có lỗi giữa mỗi lỗ PCR của thiết bị, dẫn đến khả năng tái tạo kém trong quá trình quản lý hoặc phát hiện nhiệt độ.Vui lòng kiểm tra theo hướng dẫn của thiết bị tương ứng.
2. Độ tinh khiết của mẫu không tốt.
Khuyến nghị: Các mẫu không tinh khiết sẽ dẫn đến khả năng tái tạo kém của thí nghiệm, bao gồm cả độ tinh khiết của mẫu và mồi.Tốt nhất là làm sạch lại mẫu và các mồi được làm sạch tốt nhất bằng SDS-PAGE.
3. Thời gian chuẩn bị và lưu trữ hệ thống PCR quá dài.
Gợi ý: Sử dụng hệ thống Real Time PCR cho thí nghiệm PCR ngay sau khi chuẩn bị và không để quá lâu.
4. Điều kiện khuếch đại PCR không phù hợp, trình tự mồi hoặc nồng độ không phù hợp.
Gợi ý: khẳng định trình tự mồi đúng và mồi không bị suy thoái;nếu tín hiệu khuếch đại không tốt, cố gắng giảm nhiệt độ ủ và điều chỉnh nồng độ mồi thích hợp.
5. Hệ thống PCR không phù hợp hoặc hệ thống quá nhỏ.
Gợi ý: Hệ thống phản ứng PCR quá nhỏ sẽ làm giảm độ chính xác phát hiện.Tốt nhất là sử dụng hệ thống phản ứng được đề xuất bởi công cụ PCR định lượng để chạy lại thí nghiệm Real Time PCR.
-
Bộ kit Animal Tissue Direct PCR (không lấy mẫu ...
-
Animal Tissue Direct PCR kit-UNG (không có mẫu...
-
Bộ tách chiết DNA mô động vật Bộ trích xuất DNA...
-
Động vật Total RNA Isolation Kit Total RNA Extract...
-
Cell Total RNA Isolation Kit Total RNA Isolation Kit...
-
General Plasmid Mini Kit General Plasmid DNA Ex...
