Bộ phân lập RNA tổng số thực vật Bộ tổng số RNA Purificaiton dành cho thực vật có hàm lượng Polysacarit và Polyphenol thấp
thông số kỹ thuật
50 lớp chuẩn bị, 200 lớp chuẩn bị
Bộ này sử dụng cột quay và công thức do Foregene phát triển, có thể chiết xuất hiệu quả RNA tổng số có độ tinh khiết cao và chất lượng cao từ các mô thực vật khác nhau với hàm lượng polysacarit và polyphenol thấp.Đối với các mẫu thực vật có hàm lượng polysaccharid hoặc polyphenol cao, nên sử dụng Plant Total RNA Isolation Plus Kit để có kết quả tách chiết RNA tốt hơn.Bộ này cung cấp cột Làm sạch DNA có thể dễ dàng loại bỏ DNA bộ gen khỏi dịch nổi và dịch ly giải mô.Cột chỉ chứa RNA có thể liên kết RNA hiệu quả.Bộ có thể xử lý một số lượng lớn mẫu cùng một lúc.
Toàn bộ hệ thống không chứa RNase, vì vậy RNA tinh khiết sẽ không bị phân hủy.Bộ đệm PRW1 và Bộ đệm PRW2 có thể đảm bảo rằng RNA thu được không bị nhiễm protein, DNA, ion và các hợp chất hữu cơ.
thành phần bộ
| Bộ đệm PSL1, Bộ đệm PS, Bộ đệm PSL2 |
| Bộ đệm PRW1, Bộ đệm PRW2 |
| ddH không có RNase2O, cột làm sạch DNA |
| Cột chỉ RNA |
| Hướng dẫn |
Tính năng & ưu điểm
■ Vận hành ở nhiệt độ phòng (15-25℃) trong toàn bộ quá trình, không cần ngâm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.
■ Bộ kit hoàn chỉnh Không chứa RNase, không cần lo lắng về sự phân hủy RNA.
■ Cột Làm sạch DNA liên kết đặc biệt với DNA, do đó bộ kit có thể loại bỏ nhiễm bẩn DNA bộ gen mà không cần thêm DNase.
■ Năng suất RNA cao: Cột chỉ RNA và công thức độc đáo có thể tinh sạch RNA một cách hiệu quả.
■ Tốc độ nhanh: dễ vận hành và có thể hoàn thành trong vòng 30 phút.
■ An toàn: không cần thuốc thử hữu cơ.
■ Chất lượng cao: Các đoạn RNA tinh khiết có độ tinh khiết cao, không chứa protein và các tạp chất khác, có thể đáp ứng các ứng dụng thử nghiệm hạ nguồn khác nhau.
ứng dụng bộ
Nó phù hợp để chiết xuất và tinh chế RNA tổng số từ các mẫu mô thực vật tươi hoặc đông lạnh (đặc biệt là mô lá thực vật tươi) với hàm lượng polysacarit và polyphenol thấp.
quy trình làm việc
Biểu đồ
Plant Total RNA Isolation Kit Plus đã xử lý 50mg polysacarit và polyphenol của lá tươi, đồng thời 5% RNA tinh khiết đã được kiểm tra bằng điện di.
1: Chuối
2: Bạch quả
3: Bông
4: Lựu
Bảo quản và thời hạn sử dụng
Bộ sản phẩm có thể được bảo quản trong 12 tháng ở nhiệt độ phòng (15–25 ℃) trong môi trường khô ráo và 2–8 ℃ trong thời gian dài hơn (24 tháng).
Bộ đệm PSL1 có thể được bảo quản ở 4 ℃ trong 1 tháng sau khi thêm 2-hydroxy-1-ethanethiol (tùy chọn).
Hướng dẫn phân tích vấn đề
Các phân tích sau đây về các vấn đề bạn có thể gặp phải trongtổng số nhà máyRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
Cột quay bị tắc
Sự tắc nghẽn của cột kéo sợi sẽ làm cho sản lượng RNA bị giảm hoặc thậm chí không thể tinh chế được để thu được RNA và chất lượng của RNA thu được sẽ thấp.
Phân tích nguyên nhân phổ biến:
1. Mẫu không bị hỏng hoàn toàn.
Việc phân mảnh mẫu không hoàn chỉnh có thể chặn Cột Làm sạch DNA, điều này cũng có thể ảnh hưởng đến năng suất và chất lượng RNA.Chúng tôi khuyến nghị rằng khi thực hiện phân mảnh mẫu, hãy nhanh chóng nghiền một lượng nitơ lỏng vừa đủ để phá vỡ các mô như thành tế bào và màng tế bào của mẫu càng nhiều càng tốt.Đối với các mẫu polysacarit polyphenol thực vật, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Bộ phân lập RNA tổng số thực vật Plus.
2. Hút phần nổi phía trên cột Làm sạch DNA, hút các mảnh vụn tế bào có thể có.
Các mảnh vụn tế bào đã hút có thể làm tắc nghẽn Cột chỉ chứa RNA trong quy trình hấp phụ RNA (xem bước 5 của quy trình, bước 6 của quy trình polysaccharid polyphenol).Chúng tôi khuyến nghị rằng phải cẩn thận khi hút phần nổi phía trên này để tránh các mảnh vụn tế bào bị hút vào.
3. Lượng mẫu ban đầu quá lớn.
Việc sử dụng mẫu quá nhiều sẽ dẫn đến sự phân mảnh mẫu không đầy đủ hoặc quá trình ly giải tế bào không hoàn toàn bằng Bộ đệm PRL1 hoặc Bộ đệm PSL1, dẫn đến cột tinh chế bị tắc cho các hoạt động tinh chế.Plant Total RNA Isolation Kit có tối đa ban đầu là 50 mg cho mỗi lần tinh chế một mẫu đã vận hành.Đối với các mẫu thực vật chứa polysacarit polyphenol, chúng tôi khuyên bạn nên dùng thử Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. Nhiệt độ của máy ly tâm quá thấp.
Phân lập và tinh chế toàn bộ RNA ngoại trừ sự phá vỡ nitơ lỏng của mô mẫu, tất cả các bước được thực hiện ở nhiệt độ phòng (20-25 °C).Một số máy ly tâm nhiệt độ thấp có nhiệt độ dưới 20 °C, có thể gây tắc nghẽn trong Cột làm sạch DNA và/hoặc Cột chỉ RNA.Nếu điều này xảy ra, đặt nhiệt độ máy ly tâm ở mức 20-25 °C và làm ấm trước hỗn hợp ly giải và/hoặc thêm phần nổi phía trên của quá trình tách etanol đến 37 °C.
Không chiết xuất RNA hoặc năng suất RNA thấp
Thông thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi như: hàm lượng RNA mẫu, phương pháp thao tác, thể tích rửa giải, v.v.
Phân tích các nguyên nhân phổ biến như sau:
1. Quá trình ly tâm trong bể nước đá hoặc nhiệt độ thấp (4°C) được thực hiện trong quá trình vận hành.
Gợi ý: Vận hành ở nhiệt độ phòng (15-25°C) trong toàn bộ quá trình, không ngâm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.
2.RNA đã bị biến chất do bảo quản mẫu không đúng cách hoặc bảo quản mẫu quá lâu.
Khuyến nghị: Các mẫu mới lấy phải được đông lạnh nhanh trong nitơ lỏng, sau đó bảo quản ở -80°C trong thời gian dài, tránh làm đông và rã đông mẫu nhiều lần;hoặc ngâm ngay mẫu vào dung dịch ổn định RNA RNAlater (mẫu động vật).
3.Sự phân mảnh và ly giải mẫu không đủ dẫn đến tắc nghẽn cột tinh chế.
Gợi ý: Khi nghiền mô, vui lòng đảm bảo rằng mô đã được nghiền đủ và nhanh chóng chuyển mô vào Bộ đệm PSL1 đã chuẩn bị trước (xác nhận rằng tỷ lệ β-ME chính xác đã được thêm vào, xem bước 1 của quy trình).
4. Dung dịch rửa giải được thêm vào không chính xác.
Đề xuất: Đảm bảo rằng ddH không chứa RNase2O được nhỏ giọt vào giữa màng cột tinh chế.
5. Thể tích chính xác của etanol tuyệt đối không được thêm vào Bộ đệm PSL2 hoặc Bộ đệm PRW2.
Đề xuất: Vui lòng làm theo hướng dẫn, thêm đúng thể tích ethanol tuyệt đối vào Buffer PSL2 và Buffer PRW2 và trộn đều trước khi sử dụng bộ kit.
6.Lượng mẫu mô không phù hợp.
Gợi ý: Sử dụng 50 mg mô trên 500 μl Buffer PSL1.Sử dụng quá nhiều mô sẽ làm giảm lượng RNA chiết xuất và độ tinh khiết của RNA thu được cũng sẽ giảm.Chúng tôi đặc biệt khuyến nghị rằng liều lượng mẫu ban đầu không được vượt quá 50 mg cho mỗi hoạt động chiết xuất RNA.
7. Thể tích rửa giải không phù hợp hoặc rửa giải không đầy đủ.
Gợi ý: Thể tích rửa giải của cột tinh chế là 50-200 μl;nếu hiệu quả rửa giải không đạt yêu cầu, nên kéo dài thời gian ở nhiệt độ phòng sau khi thêm ddH không chứa RNase đã được làm nóng trước2O, chẳng hạn như 5-10 phút.
8. Cột tinh chế có cặn ethanol sau khi rửa bằng Buffer PRW2.
Gợi ý: Nếu ly tâm ống rỗng trong 1 phút và vẫn còn etanol sau khi rửa trong Buffer PRW2, bạn có thể tăng thời gian ly tâm ống rỗng lên 2 phút hoặc đặt cột tinh chế ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để loại bỏ hoàn toàn etanol còn sót lại.
9. Bộ dụng cụ được sử dụng không đúng cách.
Đề xuất: Đối với các mẫu thực vật chứa polysacarit polyphenolic, sử dụng các bộ dụng cụ thông thường như Bộ phân lập RNA tổng số thực vật có thể không thu được các mẫu RNA lý tưởng.Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Plant Total RNA IsolationKit Plus, được thiết kế đặc biệt cho các mẫu thực vật polysacarit polyphenolic.Bộ dụng cụ được phát triển đặc biệt để chiết xuất RNA từ các mẫu thực vật chứa polyphenol và polysacarit.
Giá trị OD260/OD280 thấp
Rửa giải RNA bằng ddH2O và được sử dụng để đọc máy quang phổ dẫn đến giá trị OD260/OD280 thấp.Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (thay vì RNase-Free ddH2O để rửa giải RNA) để thu được các giá trị OD260/OD280 tương đối chính xác, hãy xem “Xét nghiệm tinh chế và cô đặc RNA” trên trang 19.
RNA tinh khiết bị phân hủy
Chất lượng của RNA tinh khiết có liên quan đến các yếu tố như bảo quản mẫu, nhiễm RNase và thao tác.
Phân tích các nguyên nhân phổ biến:
1. Các mẫu mô không được lưu trữ kịp thời sau khi lấy.
Khuyến nghị: Nếu các mẫu mô không được sử dụng kịp thời sau khi lấy, vui lòng bảo quản chúng trong nitơ lỏng ở nhiệt độ thấp ngay lập tức hoặc chuyển chúng đến -80°C để bảo quản lâu dài sau khi đông lạnh nhanh trong nitơ lỏng hoặc ngâm ngay mẫu vào dung dịch RNAlater ổn định RNA (mẫu động vật).Để chiết xuất RNA, hãy cố gắng sử dụng các mẫu mô mới được thu thập.
2. Lặp lại quá trình đông lạnh và rã đông các mẫu mô.
Gợi ý: Khi bảo quản các mẫu mô, tốt nhất nên cắt thành từng miếng nhỏ để bảo quản và lấy ra một phần khi sử dụng để tránh sự phân hủy RNA do mẫu bị đông lạnh và rã đông nhiều lần.
3.RNase được đưa vào phòng phẫu thuật hoặc không đeo găng tay, khẩu trang dùng một lần, v.v.
Đề xuất: Các thí nghiệm chiết xuất RNA được thực hiện tốt nhất trong các hoạt động RNA riêng biệt và bàn thí nghiệm phải được làm sạch trước khi thí nghiệm, đồng thời đeo găng tay và khẩu trang dùng một lần trong suốt quá trình thí nghiệm để tránh sự suy giảm RNA do đưa RNase đến mức tối đa.
4. Thuốc thử bị nhiễm RNase trong quá trình sử dụng.
Đề xuất: Thay thế bằng một loạt bộ tách chiết RNA tổng số thực vật mới cho các thí nghiệm liên quan.
5. Các ống ly tâm và đầu pipet được sử dụng để thao tác RNA bị nhiễm RNase.
Đề xuất: Đảm bảo rằng các ống ly tâm, đầu pipet, pipet, v.v. được sử dụng trong chiết xuất RNA đều không chứa RNase.
Tài liệu chỉ dẫn:
