Bộ công cụ tách chiết RNA tổng số động vật Bộ tách chiết và tinh chế RNA tổng số cho mô và tế bào động vật
Bộ mô tả:
Trích xuất nhanh chóng và hiệu quả RNA tổng số có độ tinh khiết cao và chất lượng cao từ các mô động vật khác nhau.
Không cần phải lo lắng về sự suy giảm RNA.Toàn bộ hệ thống không có RNase
Loại bỏ hiệu quả DNA bằng Cột làm sạch DNA
Loại bỏ DNA mà không cần thêm DNase
Đơn giản—tất cả các thao tác được hoàn thành ở nhiệt độ phòng
Thao tác nhanh chóng có thể được hoàn thành trong 30 phút
An toàn—không sử dụng thuốc thử hữu cơ
Độ tinh khiết cao—OD260/280≈1.8-2.1
Mô tả bộ dụng cụ
50 lớp chuẩn bị, 200 lớp chuẩn bị
Bộ này sử dụngcột quay và công thứcđược phát triển bởi công ty chúng tôi, có thể chiết xuất RNA tổng số có độ tinh khiết và chất lượng cao từ các mô động vật khác nhau với hiệu quả cao. Nó cung cấp Cột làm sạch DNA hiệu quả, có thể dễ dàng tách và hấp thụ DNA bộ gen từ dịch nổi phía trên và dịch ly giải mô, đơn giản và tiết kiệm thời gian;Cột chỉ RNA có thể liên kết RNA một cách hiệu quả và có thể được xử lý đồng thời với một công thức duy nhất Rất nhiều mẫu.
Toàn bộ hệ thống không có RNase, do đó RNA chiết xuất không bị suy giảm;Hệ thống rửa đệm Buffer RW1, Buffer RW2 để RNA thu được không bị ô nhiễm protein, DNA, ion và hợp chất hữu cơ.
thành phần bộ
| Bộ phân lập RNA tổng số động vật | ||
| thành phần bộ | LẠI-03011 | LẠI-03014 |
| 50T | 200 tấn | |
| Đệm RL1* | 25ml | 100ml |
| đệm RL2 | 15ml | 60ml |
| Đệm RW1* | 25ml | 100ml |
| đệm RW2 | 24ml | 96ml |
| ddH2O không chứa RNase | 10ml | 40ml |
| Cột chỉ RNA | 50 | 200 |
| Cột làm sạch DNA | 50 | 200 |
| Cẩm nang hướng dẫn | 1 miếng | 1 miếng |
Thông tin sản phẩm
| Định dạng | cột quay | thành phần thanh lọc | Cột tiền thân, thuốc thử |
| Tuôn ra | 1-24 mẫu | Thời gian mỗi lần chuẩn bị | ~30 phút (24 mẫu) |
| máy ly tâm | Máy ly tâm để bàn | tách nhiệt phân | tách ly tâm |
| Vật mẫu | mô động vật;tế bào | số lượng mẫu | Mô:10-20 mg;Ô:(1-5)×106 |
| Thể tích rửa giải | 50-200 μL | Khối lượng tải tối đa | 850 μL |
Tính năng & ưu điểm
■ Không cần lo lắng về sự phân hủy RNA;toàn bộ hệ thống không có RNase
■ Loại bỏ hiệu quả DNA bằng Cột làm sạch DNA
■ Loại bỏ DNA mà không thêm DNase
■ Đơn giản-tất cả các hoạt động được hoàn thành ở nhiệt độ phòng
■ Thao tác nhanh có thể hoàn thành trong 30 phút
■ An toàn-không cần thuốc thử hữu cơ
■ Độ tinh khiết cao -OD260/280≈1,8-2,1
ứng dụng bộ
Nó phù hợp để chiết xuất và tinh chế RNA tổng số từ nhiều loại mô động vật tươi hoặc đông lạnh hoặc tế bào nuôi cấy.
Thông số sản phẩm
■ Các ứng dụng xuôi dòng: tổng hợp cDNA chuỗi đầu tiên, RT-PCR, nhân bản phân tử, Northern Blot, v.v.
■ Mẫu: mô động vật, tế bào nuôi cấy
■ Liều dùng: Mô 10-20mg, Tế bào(2-5)×106
■ Khả năng liên kết DNA tối đa của cột tinh sạch: 80 μg
■ Thể tích rửa giải: 50-200 μl
Biểu đồ
Animal Total RNA Isolation Kit đã xử lý 20mg
Mẫu chuột tươi, lấy 5% RNA tổng số tinh khiết 1% agar
Điện di Glycogel
1: Lá lách 2: Thận
3: Gan 4: Tim
Bảo quản và thời hạn sử dụng
Bộ sản phẩm có thể được bảo quản trong 24 tháng ở nhiệt độ phòng (15–25 ℃) hoặc 2–8 ℃ trong thời gian dài hơn.Bộ đệm RL1 có thể được bảo quản ở 4 ℃ trong 1 tháng sau khi thêm β- mercaptoethanol (tùy chọn).
Bài viết được trích dẫn
1.NẾU:18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Các hạt nano giống như lipid được nạp mRNA để chỉnh sửa cơ sở gan thông qua việc tối ưu hóa thiết kế tổng hợp trung tâm.quảng cáochức năng.mẹ.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.NẾU:18.187:Anh X, Hong W, Yang J, et al.Quá trình chết theo chương trình tự phát của các tế bào trong quá trình chuẩn bị tế bào gốc trị liệu có tác dụng điều hòa miễn dịch thông qua việc giải phóng phosphatidylserine.Mục tiêu truyền tín hiệu Ther.2021 ngày 14 tháng 7;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.NẾU:17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.Sửa đổi N7-Methylguanosine tRNA giúp tăng cường dịch mã mRNA gây ung thư và thúc đẩy sự tiến triển của ung thư đường mật trong gan.Tế bào mol.2021 Ngày 29 tháng 7:S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.NẾU:9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.Biến đổi m6A qua trung gian Mettl14 tạo điều kiện thuận lợi cho quá trình tái tạo gan bằng cách duy trì cân bằng nội môi mạng lưới nội chất.Tế bào Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Bộ dụng cụ phân lập RNA cho các nguồn mẫu kháccó sẵn:
Tế bào, thực vật, virus, máu, v.v.
RNA không được chiết xuất hoặc năng suất RNA thấp
Thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi, chẳng hạn như: hàm lượng RNA mẫu mô, phương pháp vận hành, thể tích rửa giải, v.v.
1. Quá trình ly tâm trong bể nước đá hoặc đông lạnh (4 °C) được thực hiện trong quá trình vận hành.
Khuyến nghị: Vận hành ở nhiệt độ phòng (15-25°C) trong suốt quá trình, không ngâm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.
2. Bảo quản mẫu không đúng cách hoặc quá thời gian bảo quản mẫu.
Khuyến nghị: Bảo quản mẫu ở -80 °C hoặc làm đông lạnh trong nitơ lỏng và tránh sử dụng nhiều lần làm đông lạnh-rã đông;cố gắng sử dụng mô tươi hoặc tế bào nuôi cấy để tách chiết RNA.
3. Ly giải mẫu không đủ.
Khuyến nghị: Khi đồng nhất hóa mô, hãy đảm bảo rằng mô được đồng nhất hóa đầy đủ và các tế bào mô được phân chia đủ để giải thích sự giải phóng RNA.
4. Dung dịch rửa giải không được thêm chính xác.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng ddH không chứa RNase2O được thêm từng giọt vào giữa màng cột tinh chế.
5. Thể tích chính xác của etanol tuyệt đối đã không được thêm vào Dung dịch đệm RL2 hoặc Dung dịch đệm RW2.
Khuyến nghị: Làm theo hướng dẫn, thêm đúng lượng ethanol tuyệt đối vào Buffer RL2 và Buffer RW2 và trộn đều trước khi sử dụng bộ kit.
6. Liều lượng mẫu mô không phù hợp.
Khuyến nghị: Sử dụng 10-20 mg mô hoặc (1-5) × 106tế bào trên mỗi 500 μl đệm RL1, vì việc sử dụng quá nhiều mô có thể dẫn đến giảm chiết xuất RNA.
7. Thể tích rửa giải không đúng hoặc rửa giải không đầy đủ.
Khuyến nghị: Thể tích rửa giải của cột tinh chế là 50-200 μl;nếu hiệu quả rửa giải không đạt yêu cầu, nên kéo dài thời gian đặt ở nhiệt độ phòng sau khi thêm ddH không chứa RNase đã được làm nóng trước2O, ví dụ như trong 5-10 phút.
8. Cột tinh chế có cặn ethanol sau khi rửa Buffer RW2.
Khuyến nghị: Nếu có dư lượng ethanol sau khi rửa Buffer RW2, hãy ly tâm ống rỗng trong 1 phút, thời gian cho quá trình ly tâm ống rỗng có thể tăng lên 2 phút hoặc cột tinh chế có thể được đặt ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để loại bỏ hoàn toàn lượng ethanol còn lại.
RNA tinh khiết bị thoái hóa
Chất lượng của RNA tinh khiết có liên quan đến các yếu tố như bảo quản mẫu, nhiễm RNase và thao tác, v.v.
1. Mẫu mô không được lưu giữ kịp thời.
Khuyến nghị: Nếu các mẫu mô hoặc tế bào không được sử dụng kịp thời sau khi thu thập, hãy bảo quản lạnh ngay lập tức ở -80 °C hoặc nitơ lỏng.Để chiết xuất RNA, hãy sử dụng mẫu mô hoặc tế bào mới được lấy bất cứ khi nào có thể.
2. Làm đông-rã đông lặp đi lặp lại các mẫu mô.
Khuyến nghị: Khi lưu trữ các mẫu mô, tốt nhất nên cắt chúng thành các mảnh nhỏ để bảo quản và loại bỏ một trong các mảnh đó khi sử dụng chúng để tránh mẫu bị đóng băng nhiều lần và sự phân hủy của RNA.
3. RNase được giới thiệu hoặc không đeo găng tay, mặt nạ dùng một lần, v.v. trong quá trình hoạt động.
Khuyến nghị: Các thí nghiệm tách chiết RNA được thực hiện tốt nhất trong các phòng thao tác RNA riêng biệt và bàn được dọn sạch trước khi thực hiện thí nghiệm.
Đeo găng tay và khẩu trang dùng một lần trong suốt quá trình thí nghiệm để giảm thiểu sự phân hủy RNA do đưa RNase vào.
4. Thuốc thử bị nhiễm RNase trong quá trình sử dụng.
Khuyến nghị: Thay thế bằng Bộ tách RNA tổng số động vật mới cho các thí nghiệm liên quan.
5. Các ống ly tâm, đầu tip, v.v. được sử dụng trong thao tác RNA bị nhiễm RNase.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng các ống ly tâm, đầu tip, pipet, v.v. được sử dụng trong chiết xuất RNA đều không chứa RNase.
RNA thu được tinh khiết ảnh hưởng đến các thí nghiệm xuôi dòng
RNA được tinh chế bằng cột tinh chế, nếu hàm lượng ion muối, protein quá lớn sẽ ảnh hưởng đến thí nghiệm xuôi dòng, chẳng hạn như: phiên mã ngược, Northern Blot et al.
1. RNA rửa giải có dư lượng ion muối.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng lượng etanol chính xác đã được thêm vào Bộ đệm RW2 và thực hiện 2 lần rửa cột tinh chế ở tốc độ ly tâm được chỉ định cho hoạt động;nếu có bất kỳ dư lượng ion muối nào, hãy để cột tinh chế trong Bộ đệm RW2 trong 5 phút ở nhiệt độ phòng và thực hiện ly tâm để tối đa hóa việc loại bỏ nhiễm bẩn muối.
2. Dư lượng ethanol trong RNA rửa giải.
Khuyến nghị: Xác nhận rằng sau khi rửa dung dịch đệm RW2, hãy thực hiện thao tác ly tâm ống rỗng ở tốc độ ly tâm được chỉ định để vận hành, tăng thời gian của thao tác ly tâm ống rỗng lên 2 phút nếu vẫn còn cặn etanol hoặc để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút sau khi ly tâm ống rỗng để tối đa hóa việc loại bỏ cặn etanol.
