Cell Direct RT qPCR Kit—SYBR GREEN I Ly giải tế bào trực tiếp Cell Ready One-step qRT-PCR Kits
mô tả
Bộ kit này sử dụng một hệ thống đệm ly giải độc đáo có thể nhanh chóng giải phóng RNA từ các mẫu tế bào nuôi cấy cho các phản ứng RT-qPCR, do đó loại bỏ quá trình tinh chế RNA tốn nhiều thời gian và công sức.Mẫu RNA có thể được lấy chỉ trong 7 phút.5×Kết hợp RT trực tiếp và 2×Thuốc thử qPCR Mix-SYBR trực tiếp được cung cấp bởi bộ kit có thể thu được kết quả PCR định lượng theo thời gian thực một cách nhanh chóng và hiệu quả.
5×Kết hợp RT trực tiếp và 2×Direct qPCR Mix-SYBR có khả năng dung nạp chất ức chế mạnh và dịch ly giải của các mẫu có thể được sử dụng trực tiếp làm khuôn cho RT-qPCR.Bộ kit này chứa enzyme phiên mã ngược Foregene có ái lực cao RNA độc đáo và Hot D-Taq DNA polymerase, dNTPs, MgCl2, đệm phản ứng, chất tối ưu hóa PCR và chất ổn định.
thông số kỹ thuật
200×20μl Rxns, 1000×20μtôi Rxns
thành phần bộ
| phần tôi | đệm CL |
| Foregene Protease Plus II | |
| đệm ST | |
| Phần II | tẩy DNA |
| Kết hợp RT trực tiếp 5× | |
| 2× Kết hợp qPCR trực tiếp-SYBR | |
| Thuốc nhuộm tham chiếu ROX 50× | |
| ddH2O không chứa RNase | |
| Hướng dẫn | |
Tính năng & ưu điểm
■Đơn giản và hiệu quả : với công nghệ Cell Direct RT, các mẫu RNA có thể được lấy chỉ trong 7 phút.
■ Nhu cầu mẫu nhỏ, chỉ có thể thử nghiệm 10 ô.
■ Thông lượng cao: nó có thể nhanh chóng phát hiện RNA trong các tế bào được nuôi cấy trong các đĩa 384, 96, 24, 12, 6 giếng.
■ DNA Eraser có thể nhanh chóng loại bỏ các bộ gen được giải phóng, giúp giảm đáng kể tác động đến các kết quả thí nghiệm tiếp theo.
■ Hệ thống RT và qPCR được tối ưu hóa giúp sao chép ngược RT-PCR hai bước hiệu quả hơn và PCR đặc hiệu hơn, đồng thời chống lại các chất ức chế phản ứng RT-qPCR tốt hơn.
ứng dụng bộ
Phạm vi áp dụng: nuôi cấy tế bào.
- RNA được giải phóng khi ly giải mẫu: chỉ áp dụng cho mẫu RT-qPCR của bộ kit này.
- Bộ kit có thể được sử dụng cho các mục đích sau: phân tích biểu hiện gen, xác minh tác dụng làm im lặng gen qua trung gian siRNA, sàng lọc thuốc, v.v.
Biểu đồ
Lưu trữ và thời hạn sử dụng
Phần I của bộ này nên được bảo quản ở 4℃;Phần II nên được bảo quản ở -20℃.
Foregene Protease Plus II nên được bảo quản ở 4℃, không đóng băng ở -20℃.
thuốc thử 2×Direct qPCR Mix-SYBR nên được lưu trữ ở -20℃trong bóng tối;nếu được sử dụng thường xuyên, nó cũng có thể được lưu trữ ở 4℃ để lưu trữ ngắn hạn (sử dụng hết trong vòng 10 ngày).
Nguyên tắc thiết kế mồi Real Time PCR
Sơn lót xuôi và sơn lót ngược
Đối với Real Time PCR, thiết kế mồi rất quan trọng.Các đoạn mồi liên quan đến tính đặc hiệu và hiệu quả của quá trình khuếch đại PCR và có thể được thiết kế dựa trên các nguyên tắc sau:
Chiều dài mồi: 18-30bp.
hàm lượng GC: 40-60%.
Giá trị Tm: Phần mềm thiết kế mồi, chẳng hạn như Primer 5, có thể đưa ra giá trị Tm của mồi.Các giá trị Tm của đoạn mồi ngược dòng và xuôi dòng phải càng gần càng tốt.Công thức tính Tm cũng có thể được sử dụng: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Khi thực hiện PCR, nhiệt độ dưới giá trị Tm mồi là 5 °C thường được chọn làm nhiệt độ ủ (sự gia tăng tương ứng của nhiệt độ ủ có thể làm tăng tính đặc hiệu của phản ứng PCR).
Mồi và sản phẩm PCR:
Độ dài sản phẩm khuếch đại PCR mồi thiết kế tốt nhất là 100-150bp.
Nên tránh sơn lót thiết kế trong khu vực cấu trúc thứ cấp của mẫu càng nhiều càng tốt.
Tránh hình thành 2 hoặc nhiều bazơ bổ sung giữa 3′ đầu của mồi ngược dòng và xuôi dòng.
Không thể xuất hiện đế đầu cuối của mồi 3′ với 3 G hoặc C liên tiếp bổ sung.
Bản thân mồi không thể có cấu trúc bổ sung, nếu không cấu trúc kẹp tóc sẽ được hình thành, ảnh hưởng đến quá trình khuếch đại PCR.
ATCG nên được phân phối càng đồng đều càng tốt trong trình tự mồi và nên tránh cơ sở đầu cuối 3′ là T.
Phụ lục 1：Gói bổ sung thành phần Cell Direct RT-qPCR Kit
1.Dung dịch ly giải tế bào
|
| |||
| thành phần bộ (Hệ thống ly giải 24 giếng/giếng) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500 tấn | ||
| PhầnTÔI | đệm CL | 20ml | 100ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1ml × 2 | |
| đệm ST | 1ml × 2 | 10ml | |
| PhầnII | tẩy DNA | 400 μl | 1ml × 2 |
2.RT Trộn
|
| |
| thành phần bộ (hệ thống phản ứng 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 tấn | |
| Kết hợp RT trực tiếp 5× | 800 μl |
| ddH không có RNase2O | 1,7ml × 2 |
|
| ||
| thành phần bộ (hệ thống phản ứng 20 μl) | DRT-01011-C1 | DRT-01011-C2 |
| 200 tấn | 1000 tấn | |
| 2× Kết hợp qPCR trực tiếp-SYBR | 1ml × 2 | 1,7ml × 6 |
| Thuốc nhuộm tham chiếu ROX 50× | 40 μl | 200 μl |
| ddH không có RNase2O | 1,7ml | 10ml |
Tài liệu chỉ dẫn:
