(96 giếng) Bộ QuickEasy Cell Direct RT-qPCR – SYBR Green I
mô tả
Các(96 giếng) QuickEasyTM Bộ RT-qPCR trực tiếp cho tế bào–SYBR xanh tôicung cấpmột hệ thống đệm ly giải độc đáoto nhanh chóng giải phóng RNAtừ tế bào nuôi cấymẫu cho phản ứng RT-qPCR, loại bỏ việc tốn nhiều thời gian và công sứcQuá trình tinh sạch RNA và chỉ mất 7 phút để có được mẫu RNA cần thiết.CácKết hợp RT trực tiếp 5×Và2× Kết hợp qPCR trực tiếp-SYBRđược cung cấp trong hộp có thể nhanh chóng vàcó hiệu quả có được định lượng thời gian thựckết quả PCR.
Hỗn hợp 5× Direct RT và 2× Direct qPCR Mix-SYBR có khả năng chịu chất ức chế mạnh và có thể sử dụng dịch ly giải của mẫu được thử nghiệm làm khuôn mẫu để sao chép ngược hiệu quả và khuếch đại cụ thể.Thuốc thử chứa Phiên mã ngược độc nhất của Foregene có ái lực cao với RNA, cũng như Hot D- Taq DNA Polymerase, dNTPs, MgCl2 , dung dịch đệm phản ứng, chất ổn định và tối ưu hóa PCR, đồng thời có thể được sử dụng cùng với dung dịch đệm ly giải để phát hiện mẫu nhanh chóng, dễ dàng và chính xác, đồng thời nó có đặc điểm là độ nhạy cao, độ đặc hiệu mạnh và độ ổn định tốt.
Bộ này nhằm mục đích ly giải hệ thống vi mô của 96 tế bào nuôi cấy tốt, và có tính đồng nhất và nhất quán tốt;các thành phần của bộ cung cấp 96 phản ứng ly giải, 96 phản ứng sao chép ngược và 96×2 phản ứng qPCR, có thể đáp ứng đĩa tế bào 96 giếng để sử dụng một lần, tránh ô nhiễm do mở, đóng băng và rã đông thuốc thử nhiều lần cũng như suy giảm hiệu suất của thuốc thử.
thành phần bộ
| thành phần bộ ( 50 μHệ thống ly giải L/20µLRT hệ thống phản ứng /20μHệ thống phản ứng L qPCR) | DRT-03011 | Nhận xét | |
| 96T | |||
| PhầnI | ĐệmCL | 5mL | Tế bàoLy giải |
| tiền thânProtease Plus II | 100 μL | ||
| ĐệmST | 500 μL | ||
| Phần II | ADNCục tẩy | 100 μL | |
| Kết hợp RT trực tiếp 5× | 400 μL | RT | |
| 2× Kết hợp qPCR trực tiếp-SYBR | 1mL × 2 | qPCR | |
| Thuốc nhuộm tham chiếu ROX 50× | 400µL | ||
| RNase- Miễn phíđH2 O | 1,7mL |
| |
| Mhàng năm | 1 cái | 1 lần phục vụ | |
*: Thuốc thử ly giải DNA Eraser được bao gồm trong Phần II của bộ kit;Có thể mua riêng các thành phần Ly giải tế bào, RT và qPCR.
Tính năng & ưu điểm
■Đơn giản và hiệu quả : với công nghệ Cell Direct RT, các mẫu RNA có thể được lấy chỉ trong 7 phút.
■ Nhu cầu mẫu nhỏ, chỉ có thể thử nghiệm 10 ô.
■ Thông lượng cao: nó có thể nhanh chóng phát hiện RNA trong các tế bào được nuôi cấy trong các đĩa 384, 96, 24, 12, 6 giếng.
■ DNA Eraser có thể nhanh chóng loại bỏ các bộ gen được giải phóng, giúp giảm đáng kể tác động đến các kết quả thí nghiệm tiếp theo.
■ Hệ thống RT và qPCR được tối ưu hóa giúp sao chép ngược RT-PCR hai bước hiệu quả hơn và PCR đặc hiệu hơn, đồng thời chống lại các chất ức chế phản ứng RT-qPCR tốt hơn.
ứng dụng bộ
Phạm vi áp dụng: nuôi cấy tế bào.
- RNA được giải phóng khi ly giải mẫu: chỉ áp dụng cho mẫu RT-qPCR của bộ kit này.
- Bộ kit có thể được sử dụng cho các mục đích sau: phân tích biểu hiện gen, xác minh tác dụng làm im lặng gen qua trung gian siRNA, sàng lọc thuốc, v.v.
Lưu trữ và thời hạn sử dụng
Phần I của bộ này nên được bảo quản ở 4℃;Phần II nên được bảo quản ở -20℃.
Foregene Protease Plus II nên được bảo quản ở 4℃, không đóng băng ở -20℃.
thuốc thử 2×Direct qPCR Mix-Taqman nên được lưu trữ ở -20℃trong bóng tối;nếu được sử dụng thường xuyên, nó cũng có thể được lưu trữ ở 4℃ để lưu trữ ngắn hạn (sử dụng hết trong vòng 10 ngày).
Nguyên tắc thiết kế mồi Real Time PCR
Sơn lót xuôi và sơn lót ngược
Đối với Real Time PCR, thiết kế mồi rất quan trọng.Các đoạn mồi liên quan đến tính đặc hiệu và hiệu quả của quá trình khuếch đại PCR và có thể được thiết kế dựa trên các nguyên tắc sau:
- Chiều dài mồi: 18-30bp.
- hàm lượng GC: 40-60%.
- Giá trị Tm: Phần mềm thiết kế mồi, chẳng hạn như Primer 5, có thể đưa ra giá trị Tm của mồi.Các giá trị Tm của đoạn mồi ngược dòng và xuôi dòng phải càng gần càng tốt.Công thức tính Tm cũng có thể được sử dụng: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Khi thực hiện PCR, nhiệt độ dưới giá trị Tm mồi là 5 °C thường được chọn làm nhiệt độ ủ (sự gia tăng tương ứng của nhiệt độ ủ có thể làm tăng tính đặc hiệu của phản ứng PCR).
- Mồi và sản phẩm PCR:
- Độ dài sản phẩm khuếch đại PCR mồi thiết kế tốt nhất là 100-150bp.
- Nên tránh sơn lót thiết kế trong khu vực cấu trúc thứ cấp của mẫu càng nhiều càng tốt.
- Tránh hình thành 2 hoặc nhiều bazơ bổ sung giữa 3′ đầu của mồi ngược dòng và xuôi dòng.
- Không thể xuất hiện đế đầu cuối của mồi 3′ với 3 G hoặc C liên tiếp bổ sung.
- Bản thân mồi không thể có cấu trúc bổ sung, nếu không cấu trúc kẹp tóc sẽ được hình thành, ảnh hưởng đến quá trình khuếch đại PCR.
- ATCG nên được phân phối càng đồng đều càng tốt trong trình tự mồi và nên tránh cơ sở đầu cuối 3′ là T.
ruột thừa1：Ctrực tiếpRT-qPCR bộ thành phầngói bổ sung t
1.Giải pháp ly giải tế bào
| Dung dịch ly giải tế bào | |||
| thành phần bộ (Hệ thống ly giải 24 giếng/giếng) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100T | 500 tấn | ||
| PhầnTÔI | đệm CL | 20ml | 100ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1ml × 2 | |
| đệm ST | 1ml × 2 | 10ml | |
| PhầnII | tẩy DNA | 400 μl | 1ml × 2 |
| Kết hợp RT | |
| thành phần bộ (hệ thống phản ứng 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 tấn | |
| Kết hợp RT trực tiếp 5× | 800 μl |
| ddH không có RNase2O | 1,7ml × 2 |
| Hỗn hợp qPCR | ||
| thành phần bộ (hệ thống phản ứng 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 tấn | 1000 tấn | |
| 2× Kết hợp qPCR trực tiếp-Taqman | 1ml × 2 | 1,7ml × 6 |
| Thuốc nhuộm tham chiếu ROX 20× | 40 μl | 200 μl |
| ddH không có RNase2O | 1,7ml | 10ml |
Tài liệu chỉ dẫn:
