Bộ phân lập RNA vi-rút để tinh chế RNA vi-rút từ huyết tương, huyết thanh và các mẫu khác
Bộ mô tả:
Cat.No.RE-02011/02014
Để tinh chế RNA virus từ huyết tương, huyết thanh, dịch cơ thể không có tế bào, chất nổi trên bề mặt nuôi cấy tế bào.
Nhanh chóng phân lập và tinh chế RNA virus từ các mẫu như huyết tương, huyết thanh, dịch cơ thể không có tế bào và dịch nổi nuôi cấy tế bào.
-Không cần lo lắng về sự phân hủy RNA.Toàn bộ bộ sản phẩm không có RNase
-Đơn giản—tất cả các thao tác được hoàn thành ở nhiệt độ phòng
-Thao tác nhanh chóng có thể được hoàn thành sau 20 phút
-Năng suất RNA cao: Cột chỉ RNA và công thức độc đáo có thể tinh sạch RNA một cách hiệu quả
-An toàn—không sử dụng thuốc thử hữu cơ
-Khả năng xử lý mẫu lớn—có thể xử lý tới 200μl mẫu mỗi lần.
-Chất lượng cao—ARN tinh khiết có độ tinh khiết cao, không chứa protein và các tạp chất khác, đồng thời có thể đáp ứng các ứng dụng thử nghiệm xuôi dòng khác nhau.
mô tả
Bộ này sử dụng cột quay và công thức do Foregene phát triển, có thể chiết xuất hiệu quả RNA virus có độ tinh khiết và chất lượng cao từ các mẫu như huyết tương, huyết thanh, dịch cơ thể không có tế bào và dịch nổi phía trên nuôi cấy tế bào.Bộ này đặc biệt bổ sung Linear Acrylamide, có thể dễ dàng thu được một lượng nhỏ RNA từ các mẫu.Cột chỉ RNA có thể liên kết RNA một cách hiệu quả.Bộ có thể xử lý một số lượng lớn mẫu cùng một lúc.
Toàn bộ bộ kit không chứa RNase nên RNA tinh khiết sẽ không bị phân hủy.Bộ đệm viRW1 và Bộ đệm viRW2 có thể đảm bảo rằng axit nucleic của virus thu được không chứa protein, nuclease hoặc các tạp chất khác, có thể được sử dụng trực tiếp cho các thí nghiệm sinh học phân tử tiếp theo.
thông số kỹ thuật
50 lớp chuẩn bị, 200 lớp chuẩn bị
thành phần bộ
| Acrylamit tuyến tính |
| đệm viRL |
| Bộ đệm viRW1, Bộ đệm viRW2 |
| ddH không có RNase2O |
| Cột chỉ RNA |
| Hướng dẫn |
Tính năng & ưu điểm
-Không cần lo lắng về sự phân hủy RNA.Toàn bộ bộ sản phẩm không có RNase
-Đơn giản—tất cả các thao tác được hoàn thành ở nhiệt độ phòng
-Thao tác nhanh chóng có thể được hoàn thành sau 20 phút
-Năng suất RNA cao: Cột chỉ RNA và công thức độc đáo có thể tinh sạch RNA một cách hiệu quả
-An toàn—không sử dụng thuốc thử hữu cơ
-Khả năng xử lý mẫu lớn—có thể xử lý tới 200μl mẫu mỗi lần.
-Chất lượng cao—ARN tinh khiết có độ tinh khiết cao, không chứa protein và các tạp chất khác, đồng thời có thể đáp ứng các ứng dụng thử nghiệm xuôi dòng khác nhau.
thông số bộ
ứng dụng bộ:
Nó phù hợp để chiết xuất và tinh chế RNA virus trong các mẫu như huyết tương, huyết thanh, dịch cơ thể không có tế bào và dịch nổi nuôi cấy tế bào.
quy trình làm việc
Điều kiện bảo quản
- Bộ sản phẩm có thể được bảo quản trong 24 tháng ở nhiệt độ phòng (15-25℃), hoặc 2-8℃ trong thời gian dài hơn.
-Dung dịch Acrylamide tuyến tính có thể được bảo quản ở nhiệt độ phòng trong 7 ngày.Sau khi nhận được bộ sản phẩm, vui lòng lấy dung dịch Linear Acrylamide ra và bảo quản ở -20℃.
-Sau khi thêm Linear Acrylamide vào Buffer viRL, nó có thể được bảo quản ở 2-8℃ trong tối đa 48h.Vui lòng sử dụng dung dịch mới chuẩn bị.
Hướng dẫn phân tích vấn đề
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Không chiết xuất được RNA hoặc sản lượng axit nucleic thấp
Thông thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả thu hồi như: hàm lượng RNA mẫu, phương pháp vận hành, thể tích rửa giải, v.v.。
Phân tích các nguyên nhân phổ biến：
1. Bể nước đá hoặc ly tâm ở nhiệt độ thấp (4 ° C) trong quá trình vận hành.
Đề xuất: Hoạt động ở nhiệt độ phòng (15-25 ° C), không bao giờ ngâm nước đá và máy ly tâm ở nhiệt độ thấp.
2. Bảo quản mẫu không đúng cách hoặc lưu mẫu quá lâu.
Đề xuất: Bảo quản mẫu ở -80 ° C hoặc đông lạnh trong nitơ lỏng và tránh sử dụng đông lạnh-rã đông nhiều lần;cố gắng sử dụng các mẫu mới được thu thập để chiết xuất RNA.
3. Ly giải mẫu không đủ
Khuyến nghị: Vui lòng đảm bảo rằng mẫu và dung dịch làm việc (Acrylamide tuyến tính) đã được trộn kỹ và ủ trong 10 phút ở nhiệt độ phòng (15-25 ° C)
4. Dung dịch rửa giải được thêm vào không chính xác
Khuyến nghị: Đảm bảo rằng RNase-Free ddH2O được thêm vào giữa màng của cột tinh chế
5.Thể tích ethanol khan không phù hợp trong Buffer viRW2
Đề xuất: Vui lòng làm theo hướng dẫn, thêm đúng lượng ethanol khan vào Buffer viRW2 và trộn đều trước khi sử dụng bộ sản phẩm。
6. Sử dụng mẫu không đúng cách.
Gợi ý: 200µl mẫu trên 500μl Buffer viRL.Thể tích mẫu quá nhiều sẽ làm giảm tốc độ chiết xuất RNA.
7. Thể tích rửa giải không đúng hoặc rửa giải không đầy đủ.
Gợi ý: Thể tích rửa giải của cột tinh chế là 30-50μl;nếu hiệu quả rửa giải không đạt yêu cầu, nên thêm ddH không chứa RNase đã được làm nóng trước2O và kéo dài thời gian đặt ở nhiệt độ phòng, chẳng hạn như 5-10 phút
8.Cột lọc có cặn ethanol sau khi rửa trong Buffer viRW2.
Gợi ý: Nếu etanol vẫn còn sau khi rửa trong Buffer viRW2 và ly tâm ống rỗng trong 2 phút, cột tinh chế có thể được để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút sau khi ly tâm ống rỗng để loại bỏ hoàn toàn etanol còn lại.
Sự xuống cấp của các phân tử RNA tinh khiết
Chất lượng của RNA tinh khiết có liên quan đến các yếu tố như bảo quản mẫu, nhiễm RNase và vận hành.
Phân tích các nguyên nhân phổ biến：
1. Các mẫu được thu thập không được lưu trữ kịp thời.
Đề xuất: Nếu mẫu không được sử dụng kịp thời sau khi lấy, vui lòng bảo quản mẫu ở -80 ℃ hoặc nitơ lỏng ngay lập tức.Để chiết xuất các phân tử RNA, hãy cố gắng sử dụng các mẫu mới được thu thập bất cứ khi nào có thể.
2. Các mẫu đã thu thập bị đóng băng và rã đông nhiều lần.
Đề xuất: Tránh đông lạnh và rã đông nhiều lần (không quá một lần) trong quá trình lấy và bảo quản mẫu, nếu không sản lượng axit nucleic sẽ giảm.
3.RNase được đưa vào phòng mổ hoặc không đeo găng tay, khẩu trang, v.v. dùng một lần.
Gợi ý: Thí nghiệm tách chiết phân tử ARN tốt nhất nên thực hiện trong phòng thao tác ARN riêng biệt, bàn thí nghiệm được vệ sinh sạch sẽ trước khi thí nghiệm.Đeo găng tay và khẩu trang dùng một lần trong suốt quá trình thí nghiệm để tránh sự phân hủy RNA do đưa RNase vào.
4. Thuốc thử bị nhiễm RNase trong quá trình sử dụng.
Đề xuất: Thay thế bằng Bộ tách RNA Vi-rút mới cho các thí nghiệm liên quan.
5. Sự nhiễm bẩn RNase của các ống ly tâm, đầu pipet, v.v. Đề xuất: Đảm bảo rằng các ống ly tâm, đầu pipet và pipet đều không có RNase.
Các phân tử RNA tinh khiết đã ảnh hưởng đến các thí nghiệm xuôi dòng
Các phân tử RNA được tinh chế bằng cột tinh chế sẽ ảnh hưởng đến các thí nghiệm tiếp theo nếu có quá nhiều ion muối hoặc protein, chẳng hạn như: phiên mã ngược, Northern Blot, v.v.。
1. Có các ion muối còn lại trong các phân tử RNA được rửa giải.
Khuyến nghị: Đảm bảo rằng lượng etanol khan đã được thêm chính xác vào Bộ đệm viRW2 và rửa cột tinh chế hai lần theo tốc độ ly tâm chính xác trong hướng dẫn vận hành; Nếu vẫn còn các ion muối, bạn có thể thêm Bộ đệm viRW2 vào cột tinh chế và để nó ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.Sau đó thực hiện ly tâm để loại bỏ ô nhiễm ion muối ở mức độ lớn nhất
2.Có ethanol còn lại trong các phân tử RNA rửa giải
Gợi ý: sau khi xác nhận rằng các cột tinh chế đã được rửa sạch bằng Buffer viRW2, hãy thực hiện ly tâm ống rỗng theo tốc độ ly tâm trên hướng dẫn vận hành.Nếu vẫn còn ethanol, có thể để yên trong 5 phút ở nhiệt độ phòng sau khi ly tâm trong ống rỗng để loại bỏ lượng ethanol còn lại ở mức tối đa.
Tài liệu chỉ dẫn:
Hướng dẫn sử dụng Kit phân lập RNA virus
