Bộ phân lập RNA tổng số thực vật Plus Total RNA Purificaiton Kit dành cho thực vật giàu Polysacarit và Polyphenol
Bộ mô tả:
Cat.No.RE-05021/05022/05024
Để tinh chế RNA tổng số từ các mẫu thực vật nói chung có chứa các thành phần polysacarit và polyphenol cao.
Nhanh chóng trích xuất RNA tổng số chất lượng cao từ các mẫu thực vật với hàm lượng polysacarit và polyphenol cao.
RNase miễn phí bằng cách sử dụng cột làm sạch DNA
Đơn giản—tất cả các thao tác được hoàn thành ở nhiệt độ phòng
Thao tác nhanh chóng có thể được hoàn thành trong 30 phút
An toàn—không sử dụng thuốc thử hữu cơ 
thông số kỹ thuật
50 lớp chuẩn bị, 200 lớp chuẩn bị
Bộ này sử dụng cột quay và công thức do Foregene phát triển, có thể chiết xuất hiệu quả RNA tổng số có độ tinh khiết cao và chất lượng cao từ các mô thực vật khác nhau có hàm lượng polysacarit hoặc polyphenol cao.Nó cung cấp cột Làm sạch DNA có thể dễ dàng loại bỏ DNA bộ gen khỏi dịch nổi và dịch ly giải mô.Cột chỉ chứa RNA có thể liên kết RNA hiệu quả.Bộ có thể xử lý một số lượng lớn mẫu cùng một lúc.
Toàn bộ hệ thống không chứa RNase, vì vậy RNA tinh khiết sẽ không bị phân hủy.Bộ đệm PRW1 và Bộ đệm PRW2 có thể đảm bảo rằng RNA thu được không bị nhiễm protein, DNA, ion và các hợp chất hữu cơ.
thành phần bộ
| Bộ đệm PSL1, Bộ đệm PS, Bộ đệm PSL2 |
| Bộ đệm PRW1, Bộ đệm PRW2 |
| ddH không có RNase2O, cột làm sạch DNA |
| Cột chỉ RNA |
Tính năng & ưu điểm
■ Vận hành ở nhiệt độ phòng (15-25℃) trong toàn bộ quá trình, không cần ngâm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.
■ Bộ kit hoàn chỉnh Không chứa RNase, không cần lo lắng về sự phân hủy RNA.
■ Đặc biệt thích hợp cho việc tinh chế RNA từ các mẫu thực vật của polysacarit và polyphenol.
■ Cột Làm sạch DNA liên kết đặc biệt với DNA, do đó bộ kit có thể loại bỏ nhiễm bẩn DNA bộ gen mà không cần thêm DNase.
■ Năng suất RNA cao: Cột chỉ RNA và công thức độc đáo có thể tinh sạch RNA một cách hiệu quả.
■ Tốc độ nhanh: dễ vận hành và có thể hoàn thành trong vòng 30 phút.
■ An toàn: không cần thuốc thử hữu cơ.
■ Chất lượng cao: Các đoạn RNA tinh khiết có độ tinh khiết cao, không chứa protein và các tạp chất khác, có thể đáp ứng các ứng dụng thử nghiệm hạ nguồn khác nhau.
Thông số sản phẩm
■ Các ứng dụng xuôi dòng: tổng hợp cDNA chuỗi đầu tiên, RT-PCR, nhân bản phân tử, Northern Blot, v.v.
■ Mẫu: Mô thực vật tươi hoặc đông lạnh chứa polysacarit và polyphenol
■ Liều lượng: 50mg mô thực vật
■ Khả năng liên kết RNA tối đa của cột tinh sạch: 80 μg
■ Thể tích rửa giải: 50-200 μl
ứng dụng bộ
Nó phù hợp để chiết xuất và tinh chế RNA tổng số từ các mẫu mô thực vật tươi hoặc đông lạnh (đặc biệt là mô lá thực vật tươi) với hàm lượng polysacarit và polyphenol cao.
quy trình làm việc
Biểu đồ
Plant Total RNA Isolation Kit Plus đã xử lý 50mg polysacarit và polyphenol của lá tươi, đồng thời 5% RNA tinh khiết đã được kiểm tra bằng điện di.
1: Chuối
2: Bạch quả
3: Bông
4: Lựu
Lưu trữ và thời hạn sử dụng
Bộ này có thể được bảo quản trong 24 tháng trong điều kiện khô ráo ở nhiệt độ phòng (15-25℃);nếu cần bảo quản trong thời gian dài hơn, có thể bảo quản ở nhiệt độ 2–8℃.
Bộ đệm PSL1 có thể được đặt ở 4℃ trong 1 tháng sau khi thêm β-mercaptoethanol (nên thêm nó vào cùng thời điểm thí nghiệm).
Cột cắm
Sau khi cắm cột, hiệu suất RNA bị giảm hoặc thậm chí không thể tinh sạch RNA và khối lượng RNA thu được thấp.
Phân tích nguyên nhân chung:
1. Ngắt mẫu không triệt để.
Việc phá vỡ mẫu không hoàn toàn gây tắc nghẽn CỘT LÀM SẠCH DNA, đồng thời ảnh hưởng đến năng suất và chất lượng RNA.Chúng tôi khuyên bạn nên thao tác mài nhanh trong lượng nitơ lỏng vừa đủ khi bạn phá mẫu. Cố gắng nghiền thành tế bào mẫu, màng tế bào và các mô khác.Đối với các mẫu polysacarit polyol thực vật, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng KIT ISOLATION RNA Total Total Plant PLUS PLUS.
2. Khi hút phần nổi phía trên mẫu đã tách bằng Cột làm sạch DNA, có thể hít phải kết tủa phân mảnh tế bào.
Các phần trầm tích bị phân mảnh tế bào được lấy sẽ gây ra Cột CHỈ CÓ RNA sẽ bị chặn khi thực hiện thao tác hấp phụ RNA (xem bước 6).Chúng tôi khuyên bạn nên cẩn thận khi hút phần nổi phía trên này để tránh các mảnh vụn tế bào bị hút.
3. Lượng mẫu ban đầu quá nhiều.
Việc sử dụng mẫu quá nhiều sẽ dẫn đến sự phân mảnh mẫu không đầy đủ hoặc quá trình ly giải tế bào không hoàn toàn bởi Bộ đệm PSL1, dẫn đến tắc nghẽn cột tinh chế trong quá trình tinh chế.Plant Total RNA Isolation Kit Mỗi mẫu hoạt động tinh khiết đơn lẻ là 50 mg.Đối với các mẫu polysacarit polyol thực vật, chúng tôi khuyên bạn nên thử Plant Total RNA ISOLATION KIT PLUS.
4. Nhiệt độ của máy ly tâm quá thấp.
Toàn bộ quá trình tách chiết và tinh sạch RNA được thực hiện ở nhiệt độ phòng (20-25°C), ngoại trừ mô mẫu bị phá vỡ bởi nitơ lỏng. Nhiệt độ của một số máy ly tâm đông lạnh thấp hơn 20℃, điều này có thể gây tắc nghẽn Cột Làm sạch DNA và/hoặc Cột Chỉ RNA.Nếu điều này xảy ra, đặt nhiệt độ máy ly tâm ở mức 20-25℃, Vàđảm bảo rằng hỗn hợp ly giải và/hoặc phần nổi phía trên được thêm vào etanol đã được làm nóng trước đến 37°C.
Không chiết xuất RNA hoặc năng suất RNA thấp
Thông thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi như: hàm lượng RNA mẫu, phương pháp thao tác, thể tích rửa giải, v.v.
Phân tích các nguyên nhân phổ biến như sau:
1. Quá trình ly tâm trong bể nước đá hoặc nhiệt độ thấp (4°C) được thực hiện trong quá trình vận hành.
Gợi ý: Hoạt động ở nhiệt độ phòng (15-25°C) trong toàn bộ quá trình, không tắm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.
2. RNA bị biến chất do bảo quản mẫu không đúng cách hoặc bảo quản mẫu quá lâu.
Khuyến nghị: Các mẫu mới lấy phải được đông lạnh nhanh trong nitơ lỏng, sau đó bảo quản ở -80°C trong thời gian dài, tránh làm đông và rã đông mẫu nhiều lần;hoặc ngâm ngay mẫu vào dung dịch ổn định RNA RNAlater (mẫu động vật).
3. Sự phân mảnh và ly giải mẫu không đủ dẫn đến tắc nghẽn cột tinh chế.
Gợi ý: Khi nghiền mô, vui lòng đảm bảo rằng mô đã được nghiền đủ và nhanh chóng chuyển mô vào Bộ đệm PSL1 đã chuẩn bị trước (xác nhận rằng tỷ lệ β-ME chính xác đã được thêm vào, xem bước 1 của quy trình).
4. Dung dịch rửa giải được thêm vào không chính xác.
Gợi ý: Đảm bảo rằng RNase-Free ddH2O được nhỏ vào giữa màng cột tinh chế.
5. Thể tích chính xác của etanol tuyệt đối không được thêm vào Bộ đệm PSL2 hoặc Bộ đệm PRW2.
Đề xuất: Vui lòng làm theo hướng dẫn, thêm đúng thể tích ethanol tuyệt đối vào Buffer PSL2 và Buffer PRW2 và trộn đều trước khi sử dụng bộ kit.
6.Lượng mẫu mô không phù hợp.
Gợi ý: Sử dụng 50 mg mô trên 500 μl Buffer PSL1.Sử dụng quá nhiều mô sẽ làm giảm lượng RNA chiết xuất và độ tinh khiết của RNA thu được cũng sẽ giảm.Chúng tôi đặc biệt khuyến nghị rằng liều lượng mẫu ban đầu không được vượt quá 50 mg cho mỗi hoạt động chiết xuất RNA.
7. Thể tích rửa giải không phù hợp hoặc rửa giải không đầy đủ.
Gợi ý: Thể tích rửa giải của cột tinh chế là 50-200 μl;nếu hiệu quả rửa giải không đạt yêu cầu, nên kéo dài thời gian ở nhiệt độ phòng sau khi thêm ddH2O không chứa RNase đã được làm nóng trước, chẳng hạn như 5-10 phút.
8. Cột tinh chế có cặn ethanol sau khi rửa bằng BufferPRW2.
Gợi ý: Nếu ly tâm ống rỗng trong 1 phút và vẫn còn etanol sau khi rửa trong Buffer PRW2, bạn có thể tăng thời gian ly tâm ống rỗng lên 2 phút hoặc đặt cột tinh chế ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để loại bỏ hoàn toàn etanol còn sót lại.
9. Bộ dụng cụ được sử dụng không đúng cách.
Đề xuất: Đối với các mẫu thực vật chứa polysacarit polyphenolic, sử dụng các bộ dụng cụ thông thường như Bộ phân lập RNA tổng số thực vật có thể không thu được các mẫu RNA lý tưởng.Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Plant Total RNA IsolationKit Plus, được thiết kế đặc biệt cho các mẫu thực vật polysacarit polyphenolic.Bộ dụng cụ được phát triển đặc biệt để chiết xuất RNA từ các mẫu thực vật chứa polyphenol và polysacarit.
Giá trị OD260/OD280 thấp
Quá trình rửa giải RNA bằng ddH2O và được sử dụng để đọc trên máy quang phổ dẫn đến giá trị OD260/OD280 thấp.Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng 10 mM Tris-HCl, pH 7,5 (thay vì ddH2O không chứa RNase để rửa giải RNA) để thu được các giá trị OD260/OD280 tương đối chính xác, hãy xem “Xét nghiệm tinh chế và cô đặc RNA” trên trang 19.
RNA tinh khiết bị phân hủy
Chất lượng của RNA tinh khiết có liên quan đến các yếu tố như bảo quản mẫu, nhiễm RNase và thao tác.
Phân tích các nguyên nhân phổ biến:
1. Các mẫu mô không được lưu trữ kịp thời sau khi lấy.
Khuyến nghị: Nếu các mẫu mô không được sử dụng kịp thời sau khi lấy, vui lòng bảo quản chúng trong nitơ lỏng ở nhiệt độ thấp ngay lập tức hoặc chuyển chúng đến -80°C để bảo quản lâu dài sau khi đông lạnh nhanh trong nitơ lỏng hoặc ngâm ngay mẫu vào dung dịch RNAlater ổn định RNA (mẫu động vật).Để chiết xuất RNA, hãy cố gắng sử dụng các mẫu mô mới được thu thập.
2. Lặp lại quá trình đông lạnh và rã đông các mẫu mô.
Gợi ý: Khi bảo quản các mẫu mô, tốt nhất nên cắt thành từng miếng nhỏ để bảo quản và lấy ra một phần khi sử dụng để tránh sự phân hủy RNA do mẫu bị đông lạnh và rã đông nhiều lần.
3.RNase được đưa vào phòng phẫu thuật hoặc không đeo găng tay, khẩu trang dùng một lần, v.v.
Đề xuất: Các thí nghiệm chiết xuất RNA được thực hiện tốt nhất trong các hoạt động RNA riêng biệt và bàn thí nghiệm phải được làm sạch trước khi thí nghiệm, đồng thời đeo găng tay và khẩu trang dùng một lần trong suốt quá trình thí nghiệm để tránh sự suy giảm RNA do đưa RNase đến mức tối đa.
4. Thuốc thử bị nhiễm RNase trong quá trình sử dụng.
Đề xuất: Thay thế bằng một loạt bộ tách chiết RNA tổng số thực vật mới cho các thí nghiệm liên quan.
5. Các ống ly tâm và đầu pipet được sử dụng để thao tác RNA bị nhiễm RNase.
Đề xuất: Đảm bảo rằng các ống ly tâm, đầu pipet, pipet, v.v. được sử dụng trong chiết xuất RNA đều không chứa RNase.
Tài liệu chỉ dẫn:
Hướng dẫn sử dụng Plant Total RNA Isolation Kit Plus
