Escherichia Coli O157: Bộ dụng cụ phát hiện axit nucleic H7 (Phương pháp thăm dò huỳnh quang PCR/Đông khô)
Bộ mô tả:
Cat.No.FP103
Nó được sử dụng để phát hiện và sàng lọc nhanh E. coli O157:H7 trong thực phẩm, thức ăn chăn nuôi, mẫu nước và mẫu môi trường.
mô tả
Nó dùng đểphát hiện và sàng lọc nhanh E. coli O157:H7 trong thực phẩm , thức ăn chăn nuôi , mẫu nước và mẫu môi trường .
[Nguyên tắc kiểm tra]
Theo nguyên tắc của công nghệ PCR huỳnh quang, các đoạn mồi cụ thể và đầu dò Taqman được thiết kế cho gen cụ thể của Escherichia coli O157: H7 và được phát hiện bằng thiết bị PCR huỳnh quang để nhận ra việc phát hiện Escherichia coli O157: H7 Định tính phát hiện DNA.
Nội dung lắp ráp
Lưu ý: Không bao gồm đầu dò kênh ROX.
| Cnhững người ủng hộ | Sự chỉ rõ | Qsố lượng |
| đệm A | Ống | 1 |
| đệm B | Ống | 1 |
| Kiểm soát tích cực | Ống | 1 |
| Kiểm soát tiêu cực | Ống | 1 |
Mức sử dụng dự kiến
Nó dùng để phát hiện và sàng lọc nhanh E. coli O157:H7 trong thực phẩm , thức ăn chăn nuôi , mẫu nước và mẫu môi trường .
Điều kiện bảo quản và ngày hết hạn
Bảo quản ở -20℃ trong bóng tối và tránh đóng băng và rã đông nhiều lần.
Thời hạn hiệu lực là 12tháng, và ngày sản xuất được ghi trên bao bì bên ngoài.
Dụng cụ và vật tư tiêu hao
Dụng cụ PCR định lượng huỳnh quang, súng pipet và đầu tip, máy lắc vortex, máy ly tâm mini.
Cách sử dụng
1. xử lý mẫu
1.1 Loại mẫu: Bộ kit này phù hợp với mẫu thực phẩm, thức ăn chăn nuôi, mẫu nước và các mẫu nghi ngờ nhiễm Escherichia coli O157:H7.Đối với các sản phẩm thịt chế biến sâu, đồ uống và các chất khác có chứa sắc tố, chúng cần được rửa sạch để tránh ảnh hưởng đến việc thu thập tín hiệu huỳnh quang.
1.2 Xử lý mẫu: Tham khảo "GB 4789.10-2016 Tiêu chuẩn quốc gia về an toàn thực phẩm Kiểm tra vi sinh vật thực phẩm đối với Escherichia coli O157: H7 Test" để chuẩn bị mẫu, nuôi cấy tăng sinh và phân lập Escherichia coli O157: H7.
- Nchiết xuất axit nucleic
Lấy 20 mL dung dịch làm giàu trong ống ly tâm 1,5 mL, thêm 200 μL dịch ly giải vi sinh vật (cần có bộ dụng cụ bổ sung), vortex trong 30 giây, ly tâm nhanh và đặt sang một bên.
Lưu ý: Việc chiết xuất axit nucleic từ dịch ly giải phải được hoàn thành trong vòng 10 phút và không thể lưu trữ trong thời gian dài.
3. Khuếch đại axit nucleic
3.1 Bật máy PCR định lượng huỳnh quang để sử dụng.
Dung dịch đệm A và Dung dịch đệm B từ bộ dụng cụ , làm tan chảy chúng hoàn toàn và ly tâm nhanh.Thêm 18 μL đệm A và 2 μL đệm B vào mỗi ống phản ứng PCR.Sau đó thêm 5 mL mỗi đối chứng âm tính, axit nucleic chiết xuất và đối chứng dương tính vào các ống phản ứng PCR, đậy nắp các ống và ly tâm nhanh.
3.3 Chuyển ống phản ứng PCR sang máy PCR huỳnh quang và sử dụng các quy trình sau để thực hiện các thí nghiệm khuếch đại: chọn 25 mL cho hệ thống phản ứng, thu tín hiệu huỳnh quang ở 60°C cho mỗi chu kỳ và chọn FAM cho kênh phát hiện.
| Bước chân | Chương trình | Số chu kỳ |
| 1 | 37℃ 5 phút | 1 |
| 2 | 9 5 ℃ 3 phút | 1 |
| 3 | 95°C 15 giây | 4 0 |
| 60℃ 30s (thu huỳnh quang) |
Hướng dẫn phân tích vấn đề
The following is an analysis of the problems that might be encountered in the extraction of viral RNA. We wish it would be helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems other than operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. Contact us if you need at : 028-83361257or E-mail：Tech@foregene.com。
Không chiết xuất được RNA hoặc sản lượng axit nucleic thấp
Thông thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu quả thu hồi như: hàm lượng RNA mẫu, phương pháp vận hành, thể tích rửa giải, v.v.。
Phân tích các nguyên nhân phổ biến：
1. Bể nước đá hoặc ly tâm ở nhiệt độ thấp (4 ° C) trong quá trình vận hành.
Đề xuất: Hoạt động ở nhiệt độ phòng (15-25 ° C), không bao giờ ngâm nước đá và máy ly tâm ở nhiệt độ thấp.
2. Bảo quản mẫu không đúng cách hoặc lưu mẫu quá lâu.
Đề xuất: Bảo quản mẫu ở -80 ° C hoặc đông lạnh trong nitơ lỏng và tránh sử dụng đông lạnh-rã đông nhiều lần;cố gắng sử dụng các mẫu mới được thu thập để chiết xuất RNA.
3. Ly giải mẫu không đủ
Khuyến nghị: Vui lòng đảm bảo rằng mẫu và dung dịch làm việc (Acrylamide tuyến tính) đã được trộn kỹ và ủ trong 10 phút ở nhiệt độ phòng (15-25 ° C)
4. Dung dịch rửa giải được thêm vào không chính xác
Khuyến nghị: Đảm bảo rằng RNase-Free ddH2O được thêm vào giữa màng của cột tinh chế
5.Thể tích ethanol khan không phù hợp trong Buffer viRW2
Đề xuất: Vui lòng làm theo hướng dẫn, thêm đúng lượng ethanol khan vào Buffer viRW2 và trộn đều trước khi sử dụng bộ sản phẩm。
6. Sử dụng mẫu không đúng cách.
Gợi ý: 200µl mẫu trên 500μl Buffer viRL.Thể tích mẫu quá nhiều sẽ làm giảm tốc độ chiết xuất RNA.
7. Thể tích rửa giải không đúng hoặc rửa giải không đầy đủ.
Gợi ý: Thể tích rửa giải của cột tinh chế là 30-50μl;nếu hiệu quả rửa giải không đạt yêu cầu, nên thêm ddH không chứa RNase đã được làm nóng trước2O và kéo dài thời gian đặt ở nhiệt độ phòng, chẳng hạn như 5-10 phút
8.Cột lọc có cặn ethanol sau khi rửa trong Buffer viRW2.
Gợi ý: Nếu etanol vẫn còn sau khi rửa trong Buffer viRW2 và ly tâm ống rỗng trong 2 phút, cột tinh chế có thể được để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút sau khi ly tâm ống rỗng để loại bỏ hoàn toàn etanol còn lại.
Sự xuống cấp của các phân tử RNA tinh khiết
Chất lượng của RNA tinh khiết có liên quan đến các yếu tố như bảo quản mẫu, nhiễm RNase và vận hành.
Phân tích các nguyên nhân phổ biến：
1. Các mẫu được thu thập không được lưu trữ kịp thời.
Đề xuất: Nếu mẫu không được sử dụng kịp thời sau khi lấy, vui lòng bảo quản mẫu ở -80 ℃ hoặc nitơ lỏng ngay lập tức.Để chiết xuất các phân tử RNA, hãy cố gắng sử dụng các mẫu mới được thu thập bất cứ khi nào có thể.
2. Các mẫu đã thu thập bị đóng băng và rã đông nhiều lần.
Đề xuất: Tránh đông lạnh và rã đông nhiều lần (không quá một lần) trong quá trình lấy và bảo quản mẫu, nếu không sản lượng axit nucleic sẽ giảm.
3.RNase được đưa vào phòng mổ hoặc không đeo găng tay, khẩu trang, v.v. dùng một lần.
Gợi ý: Thí nghiệm tách chiết phân tử ARN tốt nhất nên thực hiện trong phòng thao tác ARN riêng biệt, bàn thí nghiệm được vệ sinh sạch sẽ trước khi thí nghiệm.Đeo găng tay và khẩu trang dùng một lần trong suốt quá trình thí nghiệm để tránh sự phân hủy RNA do đưa RNase vào.
4. Thuốc thử bị nhiễm RNase trong quá trình sử dụng.
Đề xuất: Thay thế bằng Bộ tách RNA Vi-rút mới cho các thí nghiệm liên quan.
5. Sự nhiễm bẩn RNase của các ống ly tâm, đầu pipet, v.v. Đề xuất: Đảm bảo rằng các ống ly tâm, đầu pipet và pipet đều không có RNase.
Các phân tử RNA tinh khiết đã ảnh hưởng đến các thí nghiệm xuôi dòng
Các phân tử RNA được tinh chế bằng cột tinh chế sẽ ảnh hưởng đến các thí nghiệm tiếp theo nếu có quá nhiều ion muối hoặc protein, chẳng hạn như: phiên mã ngược, Northern Blot, v.v.。
1. Có các ion muối còn lại trong các phân tử RNA được rửa giải.
Khuyến nghị: Đảm bảo rằng lượng etanol khan đã được thêm chính xác vào Bộ đệm viRW2 và rửa cột tinh chế hai lần theo tốc độ ly tâm chính xác trong hướng dẫn vận hành; Nếu vẫn còn các ion muối, bạn có thể thêm Bộ đệm viRW2 vào cột tinh chế và để nó ở nhiệt độ phòng trong 5 phút.Sau đó thực hiện ly tâm để loại bỏ ô nhiễm ion muối ở mức độ lớn nhất
2.Có ethanol còn lại trong các phân tử RNA rửa giải
Gợi ý: sau khi xác nhận rằng các cột tinh chế đã được rửa sạch bằng Buffer viRW2, hãy thực hiện ly tâm ống rỗng theo tốc độ ly tâm trên hướng dẫn vận hành.Nếu vẫn còn ethanol, có thể để yên trong 5 phút ở nhiệt độ phòng sau khi ly tâm trong ống rỗng để loại bỏ lượng ethanol còn lại ở mức tối đa.
Tài liệu chỉ dẫn:
Hướng dẫn sử dụng Kit phân lập RNA virus
