Tỷ lệ A260/A230 thấp thường do tạp chất có bước sóng hấp thụ cực đại ở 230nm.Hãy xem những tạp chất này bao gồm những gì:

• Các chất ô nhiễm phổ biến	bước sóng hấp thụ	hiệu ứng tỷ lệ
  Chất đạm	~230nm và 280nm	Giảm đồng thời A260/A 280và A260/A 280tỷ lệ
  muối guanidin	220-240nm	Giảm A260/A 280tỉ lệ
  Phenol	~270nm	-
  trizol	~230nm và 270nm	Giảm A260/A 280tỉ lệ
  EDTA	~230nm	Giảm A260/A 280tỉ lệ
  etanol	230-240nm	Giảm A260/A 280tỉ lệ

 
 
 
Bước sóng hấp thụ và giá trị tương phản của các chất ô nhiễm phổ biến

Pô nhiễm rotein
Ô nhiễm protein có thể được coi là ô nhiễm phổ biến nhất trong quá trình chiết xuất axit nucleic.Protein tồn tại giữa pha nước phía trên và phía dướihữu cơgiai đoạn .Ô nhiễm sẽ làm giảm tỷ lệ A260/A280 và A260/A230 đồng thời và tỷ lệ A260/A230 sẽ thay đổi rõ ràng hơn so với tỷ lệ A260/A280.
Trong thời gian tiếp theophiên mã ngượcor phản ứng qPCR, dư lượng protein có thể ức chế hoặc can thiệp vào chức năng của enzyme.Cách tốt nhất để tránh nhiễm bẩn protein là ghi nhớ nguyên tắc “thà ít còn hơn nhiều, một lượng nhỏ nhiều lần” khi hút phần nổi phía trên.

2. ô nhiễm guanidin
hydrochloride (GuHCl) và guanidine thiocyanate (GTC) có tác dụng làm biến tính protein, có thể nhanh chóng phá hủy màng tế bào trong quá trình chiết xuất axit nucleic, gây biến tính và kết tủa protein.Bước sóng hấp thụ của GuHCl và GTC nằm trong khoảng 220-240 nm vàmuối guanidinium dư sẽ làm giảm tỷ lệ A260/A230.Mặc dù muối guanidinium còn lại sẽ làm giảm tỷ lệ,tác động đối với các thí nghiệm hạ lưu thực sự không đáng kể.

3. ô nhiễm trizol
Thành phần chính của Trizol là phenol.Chức năng chính của phenol là ly giải tế bào và giải phóng các chất protein và axit nucleic trong tế bào.Mặc dù phenol có thể làm biến tính protein một cách hiệu quả nhưng nó không thể ức chế hoàn toàn hoạt động của RNase.Do đó, 8 -hydroxyquinoline , guanidine isothiocyanate , β- mercaptoethanol, v.v. được thêm vào TRIzol để ức chế RNase nội sinh và ngoại sinh.
Khi chiết xuất RNA của tế bào, Trizol có thể nhanh chóng ly giải tế bào và ức chế nuclease được giải phóng khỏi tế bào, Trizol còn lại sẽ làm giảm đáng kể tỷ lệ A260/A230.
Phương pháp xử lý: Khi ly tâm cần lưu ý phenol trong Trizol dễ tan trong pha nước ở điều kiện 4° và nhiệt độ phòng.

4. dư lượng etanol
Ethanol được sử dụng trong quy trình cuối cùng để kết tủa DNA trong khi hòa tan các ion muối có thể liên kết với DNA.Bước sóng hấp thụ cao nhấtđỉnh hấp thụ củaethanol cũng ở 230-240 nm, trong đócũng sẽ làm giảm tỷ lệ A260/A230.
Phương pháp tránh dư lượng ethanol có thể được lặp lại hai lần trong quá trình rửa giải cuối cùng, thổi vàotủ húttrong hai phút để etanol bay hơi hoàn toàn trước khi thêm dung dịch đệm để rửa giải.
Tuy nhiên, cần biết rằng tỷ lệ này chỉ là một chỉ số đánh giá chất lượng RNA.Nếu các hoạt động nêu trên được quy định chặt chẽ, độ lệch giữa tỷ lệ và phạm vi tiêu chuẩn sẽ không ảnh hưởng lớn đến các thí nghiệm tiếp theo.
Những sảm phẩm tương tự:
Bộ phân lập RNA tổng số động vật
Bộ phân lập RNA tổng số thực vật
Bộ phân lập RNA tổng số tế bào
Plant Total RNA Isolation kit Plus