Khử trùng đầu pipet và ống EP, v.v.
1. Chuẩn bị 0,1% (một phần nghìn) DEPC (chất cực độc) với nước đã khử ion, sử dụng cẩn thận trong tủ hút và bảo quản ở nhiệt độ 4°C, tránh ánh sáng;
Nước DEPC là nước tinh khiết được xử lý bằng DEPC và tiệt trùng bằng nhiệt độ cao và áp suất cao.Đã được thử nghiệm không chứa RNase, DNase và proteinase.
2. Đặt đầu pipet và ống EP vào 0,1% DEPC và đảm bảo rằng đầu pipet và ống EP được đổ đầy 0,1% DEP.
3. Tránh ánh sáng, để yên, qua đêm (12-24h)
4. Hộp chứa đầu tip và ống EP không cần ngâm trong DEPC.Sau khi loại bỏ sơ bộ nước DEPC trong đầu hoặc ống EP, đóng gói và bọc lại.
5. 121 độ C, 30 phút
6. 180 độ C, khô trong vài giờ (ít nhất 3 giờ)
Lưu ý: a.Đeo găng tay cao su và khẩu trang khi xử lý DEPC!b, hoặc không khử trùng DEPC, nồi hấp 130 ℃, 90 phút (nhiều phòng thí nghiệm khử trùng ở nhiệt độ cao hai lần)
Cân nhắc chiết xuất RNA
Hai hiện tượng chính của sự thất bại trong phân lập RNA mô
RNA suy thoái và dư lượng tạp chất trong các mô,liên quan đến sự phân hủy, trước tiên chúng ta hãy xem tại sao RNA chiết xuất từ các tế bào nuôi cấy không dễ bị phân hủy.Tất cả các thuốc thử chiết RNA hiện có đều chứa các thành phần ức chế nhanh RNase.Thêm dịch ly giải vào các tế bào nuôi cấy và chỉ cần trộn đều, tất cả các tế bào có thể được trộn kỹ với dịch ly giải và các tế bào được ly giải hoàn toàn.Sau khi tế bào bị ly giải, các hoạt chất trong dịch ly giải ngay lập tức ức chế RNase nội bào nên RNA vẫn còn nguyên vẹn.Điều đó có nghĩa là, bởi vì các tế bào nuôi cấy tiếp xúc dễ dàng và hoàn toàn với dịch ly giải, nên RNA của chúng không dễ bị phân hủy;mặt khác, RNA trong mô dễ bị phân giải do các tế bào trong mô không dễ tiếp xúc nhanh với dịch ly giải.do tiếp xúc đủ.Vì thế,Giả sử có một cách để biến mô thành một tế bào duy nhất trong khi ức chế hoạt động của RNA, thì vấn đề thoái hóa có thể được giải quyết hoàn toàn.
Nghiền nitơ lỏng là phương pháp hiệu quả nhất.Tuy nhiên, phương pháp nghiền nitơ lỏng rất rắc rối, đặc biệt là khi số lượng mẫu lớn.Điều này đã tạo ra thứ tốt nhất tiếp theo: máy đồng nhất.Cácđồng hóaphương pháp không xem xét câu hỏi làm thế nào hoạt động RNase bị ức chế trước khi các tế bào được tiếp xúc với dịch ly giải, mà thay vào đó cầu nguyện rằng tốc độ phá vỡ mô nhanh hơn tốc độ RNase nội bào làm suy giảm RN.
Hiệu quả của homogenizer điện là tốt hơn,và hiệu quả của đồng nhất thủy tinh là kém, nhưng nói chung, phương pháp đồng nhất hóa không thể ngăn chặn hiện tượng xuống cấp.Do đó, nếu quá trình chiết xuất bị suy giảm, nên sử dụng máy đồng nhất điện ban đầu để nghiền bằng nitơ lỏng;bộ đồng nhất thủy tinh ban đầu nên được thay đổi thành bộ đồng nhất điện hoặc được nghiền trực tiếp bằng nitơ lỏng.Bài toán gần như khả thi 100%.được giải quyết.
Vấn đề dư lượng tạp chất ảnh hưởng đến các thí nghiệm tiếp theo có nhiều nguyên nhân khác nhau hơn là suy thoái và các giải pháp tương ứng cũng khác nhau.Tóm lại là,nếu có sự phân hủy hoặc tạp chất còn sót lại trong mô, phương pháp chiết xuất/thuốc thử cho vật liệu thí nghiệm cụ thể phải được tối ưu hóa.Bạn không cần phải sử dụng các mẫu quý giá của mình để tối ưu hóa: bạn có thể mua một số động vật nhỏ như cá/gà ở chợ, lấy phần nguyên liệu tương ứng để chiết xuất RNA và phần còn lại để chiết xuất protein – xay bằng chiết xuất từ miệng, dạ dày và ruột.
RNA mục tiêu của RNA chiết xuất được sử dụng cho các thí nghiệm tiếp theo khác nhau và yêu cầu chất lượng của nó là khác nhau
Việc xây dựng thư viện cDNA yêu cầu tính toàn vẹn của RNA mà không có dư lượng chất ức chế phản ứng enzyme;Phương Bắc yêu cầu tính toàn vẹn RNA cao hơn và yêu cầu thấp hơn đối với dư lượng chất ức chế phản ứng enzyme;RT-PCR không yêu cầu tính toàn vẹn của RNA quá cao,nhưng ức chế các phản ứng enzym.Yêu cầu dư lượng là nghiêm ngặt.Đầu vào quyết định đầu ra;mỗi khi mục tiêu là thu được RNA có độ tinh khiết cao nhất, nó sẽ tiêu tốn của con người và tiền bạc.
Thu thập/Lưu trữ mẫu
Các yếu tố ảnh hưởng đến quá trình phân hủy Sau khi mẫu rời khỏi cơ thể sống/hoặc môi trường tăng trưởng ban đầu, các enzym nội sinh trong mẫu sẽ bắt đầu phân hủy RNA,và tốc độ phân hủy có liên quan đến hàm lượng enzyme nội sinh và nhiệt độ.Theo truyền thống, chỉ có hai cách để ức chế hoàn toàn hoạt động của enzyme nội sinh: thêm lysate ngay lập tức và đồng nhất hóa triệt để và nhanh chóng;cắt thành miếng nhỏ và đông lạnh ngay trong nitơ lỏng.Cả hai cách tiếp cận đều yêu cầu thao tác nhanh.Loại thứ hai phù hợp với tất cả các mẫu, trong khi loại thứ nhất chỉ phù hợp với các mô có hàm lượng tế bào và enzyme nội sinh thấp và dễ đồng nhất hơn.Cụ thể, mô thực vật, gan, tuyến ức, tuyến tụy, lá lách, não, mỡ, mô cơ,… tốt nhất nên đông lạnh bằng nitơ lỏng trước khi tiến hành.
Phân mảnh và đồng nhất mẫu
Các yếu tố ảnh hưởng đến sự phân hủy và năng suất Sự phân mảnh mẫu làđể đồng nhất hóa triệt để, đó là để giải phóng hoàn toàn và đầy đủ RNA.Các tế bào có thể được đồng nhất hóa trực tiếp mà không bị phá vỡ.Các mô chỉ có thể được đồng nhất sau khi bị phá vỡ.Nấm men và vi khuẩn cần được phá vỡ bằng các enzym tương ứng trước khi chúng có thể được đồng nhất hóa.Các mô có hàm lượng enzyme nội sinh thấp hơn và đồng nhất hóa dễ dàng hơn có thể được nghiền nát và đồng nhất hóa cùng một lúc trong dịch ly giải bằng máy đồng hóa;mô thực vật, gan, tuyến ức, tuyến tụy, lá lách, não, mỡ, mô cơ và các mẫu khác, Chúng có hàm lượng enzyme nội sinh cao hoặc không dễ đồng nhất,vì vậy sự phá vỡ và đồng nhất hóa mô phải được thực hiện riêng biệt.Phương pháp phân mảnh đáng tin cậy nhất và hiệu quả nhất là nghiền bằng nitơ lỏng, và phương pháp đồng nhất đáng tin cậy nhất là sử dụng máy đồng nhất điện.Một lưu ý đặc biệt về quá trình nghiền bằng nitơ lỏng: mẫu không được rã đông trong toàn bộ quá trình nghiền, vì các enzym nội sinh có nhiều khả năng hoạt động hơn khi được đông lạnh.
Lựa chọn lysate
Ảnh hưởng đến sự thuận tiện của hoạt động và các yếu tố tạp chất nội sinh còn sót lại Các giải pháp ly giải thường được sử dụng hầu như có thể ức chế hoạt động của RNase.Do đó, điểm mấu chốt của việc lựa chọn giải pháp ly giải là xem xét kết hợp với phương pháp tinh sạch.Có một ngoại lệ:các mẫu có hàm lượng enzym nội sinh cao nên sử dụng dịch ly giải chứa phenol để tăng khả năng vô hoạt enzym nội sinh.
Lựa chọn phương pháp thanh lọc
Các yếu tố ảnh hưởng đến tạp chất nội sinh còn sót lại, tốc độ chiết Đối với các mẫu sạch như tế bào, có thể thu được kết quả khả quan với hầu hết mọi phương pháp tinh chế hiện có.Nhưng đối với nhiều mẫu khác, đặc biệt là những mẫu có hàm lượng tạp chất cao như thực vật, gan, vi khuẩn… thì việc lựa chọn phương pháp tinh sạch phù hợp là rất quan trọng.Phương pháp tinh chế ly tâm cột có tốc độ chiết xuất nhanh và có thể loại bỏ hiệu quả các tạp chất ảnh hưởng đến phản ứng enzyme tiếp theo của RNA, nhưng nó đắt tiền (Foregene có thể cung cấp bộ dụng cụ tiết kiệm chi phí, để biết thêm chi tiết, hãy nhấp vàođây);sử dụng các phương pháp tinh chế kinh tế và cổ điển, chẳng hạn như kết tủa LiCl, cũng có thể thu được kết quả khả quan, nhưng thời gian hoạt động kéo dài..
“Ba nguyên tắc và tám chú ý” cho quá trình trích xuất RNA
Kỷ luật 1:Chấm dứt sự ô nhiễm của các enzym ngoại sinh.
Lưu ý 1:Nghiêm túc đeo khẩu trang và găng tay.
Lưu ý 2:Các ống ly tâm, đầu tip, thanh pipet, bể điện di và bàn thí nghiệm liên quan đến thí nghiệm phải được xử lý triệt để.
Lưu ý 3:Thuốc thử/dung dịch dùng trong thí nghiệm, đặc biệt là nước, phải không chứa RNase.
Kỷ luật 2:Ngăn chặn hoạt động của các enzym nội sinh
Lưu ý 4:Chọn một phương pháp đồng nhất thích hợp.
Lưu ý 5:Chọn một lysate thích hợp.
Lưu ý 6:Kiểm soát lượng mẫu ban đầu.
Kỷ luật 3:Làm rõ mục đích trích xuất của bạn
Lưu ý 7:Với bất kỳ hệ thống lysate nào đạt đến lượng mẫu ban đầu tối đa, tỷ lệ chiết xuất thành công giảm mạnh.
Lưu ý 8:Tiêu chí kinh tế duy nhất để trích xuất RNA thành công là thành công trong các thí nghiệm tiếp theo, chứ không phải năng suất.
10 nguồn ô nhiễm RNase hàng đầu
1. Ngón tay là nguồn enzym ngoại sinh đầu tiên nên phải đeo và thay găng tay thường xuyên.Ngoài ra, cũng phải đeo khẩu trang, vì hơi thở cũng là một nguồn enzym quan trọng.Một lợi ích bổ sung của việc đeo mặt nạ găng tay là để bảo vệ người thí nghiệm.
2. Đầu pipet, ống ly tâm, pipet – RNase không thể bị vô hiệu hóa chỉ bằng cách khử trùng, vì vậy đầu pipet và ống ly tâm phải được xử lý bằng DEPC, ngay cả khi chúng được đánh dấu là xử lý DEPC.Tốt nhất là sử dụng pipet chuyên dụng, lau sạch bằng bông gòn có cồn 75% trước khi sử dụng, đặc biệt là que lấy mẫu;Ngoài ra, hãy chắc chắn không sử dụng dụng cụ tẩy đầu.
3. Nước/đệm không được nhiễm RNase.
4. Ít nhất bàn thử phải được lau sạch bằng bông gòn có cồn 75%.
5.RNase nội sinh Tất cả các mô đều chứa các enzym nội sinh, do đó, làm đông lạnh nhanh các mô bằng nitơ lỏng là cách tốt nhất để giảm sự phân hủy.Phương pháp lưu trữ/nghiền nitơ lỏng thực sự là bất tiện, nhưng đó là cách duy nhất cho các mô có hàm lượng enzyme nội sinh cao.
6. Các mẫu RNA Các sản phẩm chiết xuất RNA có thể chứa dấu vết nhiễm RNAse.
7. Tách chiết plasmid Tách chiết plasmid thường sử dụng Rnase để phân hủy RNA, và phần Rnase còn lại sẽ được tiêu hóa bằng Proteinase K và được tách chiết bằng PCI.
8. Lưu trữ RNA Ngay cả khi nó được lưu trữ ở nhiệt độ thấp, một lượng nhỏ RNase sẽ gây ra sự phân hủy RNA.Giải pháp tốt nhất để bảo quản RNA lâu dài là huyền phù muối/rượu, vì cồn ức chế tất cả hoạt động của enzym ở nhiệt độ thấp.
9. Khi cation (Ca, Mg) chứa các ion này, đun nóng ở 80C trong 5 phút sẽ làm RNA bị phân cắt, vì vậy nếu cần đun nóng RNA thì dung dịch bảo quản cần chứa chất tạo phức (1mM Natri Citrate, pH 6,4).
10. Các enzym được sử dụng trong các thí nghiệm tiếp theo có thể bị ô nhiễm bởi RNase.
10 mẹo tách chiết RNA
1: Nhanh chóng ngăn chặn hoạt động của RNase.Các mẫu nhanh chóng được đông lạnh sau khi lấy và RNase bị vô hiệu hóa do hoạt động nhanh trong quá trình ly giải.
2: Chọn phương pháp chiết xuất thích hợp cho mô có hàm lượng ribozyme cao, mô mỡ tốt nhất là sử dụng phương pháp có chứa phenol.
3: Chất lượng dự đoán yêu cầu phương Bắc, xây dựng thư viện cDNA yêu cầu tính toàn vẹn cao và RT-PCR và RPA (xét nghiệm bảo vệ Ribonuclease) không yêu cầu tính toàn vẹn cao.RT-PCR yêu cầu độ tinh khiết cao (dư lượng chất ức chế enzyme).
4: Đồng nhất hóa triệt để là chìa khóa để cải thiện năng suất và giảm thiểu sự xuống cấp.
5: Kiểm tra tính toàn vẹn của phát hiện điện di RNA, 28S: 18S = 2: 1 là một dấu hiệu đầy đủ, 1: 1 cũng được chấp nhận đối với hầu hết các thí nghiệm.
6: Loại bỏ DNA cho RT-PCR, phân tích mảng Tốt nhất là sử dụng Dnase I để loại bỏ DNA.
7: Giảm sự nhiễm enzym ngoại sinh – không thể nhập enzym từ bên ngoài vào.
8: Khi cô đặc axit nucleic nồng độ thấp, nên thêm thuốc thử đồng kết tủa.Nhưng để ngăn chặn sự nhiễm bẩn đồng kết tủa có chứa enzyme và DNA.
9: Hòa tan kỹ RNA, nếu cần đun nóng ở 65C trong 5 phút.
phương pháp bảo quản phù hợp
Nó có thể được bảo quản ở –20C trong một thời gian ngắn và ở –80C trong một thời gian dài.Bước đầu tiên trong việc cải thiện sản lượng RNA là nhận ra rằng hàm lượng RNA của các mẫu khác nhau rất khác nhau.Hàm lượng dồi dào cao (2-4ug/mg) như gan, tụy, tim, hàm lượng dồi dào trung bình (0,05-2ug/mg) như não, phôi, thận, phổi, tuyến ức, buồng trứng, hàm lượng dồi dào thấp (<0,05ug/mg) như bàng quang, xương, mỡ.
1: Ly giải tế bào để giải phóng RN – nếu RNA không được giải phóng, năng suất sẽ giảm.Đồng nhất hóa bằng điện hoạt động tốt hơn các phương pháp đồng nhất hóa khác, nhưng cũng có thể cần kết hợp với các phương pháp khác, chẳng hạn như nghiền nitơ lỏng, phân hủy bằng enzym (Lysozyme/Lyticase)
2: Tối ưu hóa phương pháp chiết xuất.Vấn đề lớn nhất với các phương pháp dựa trên phenol là sự phân tầng không hoàn chỉnh và mất một phần RNA (không thể loại bỏ hoàn toàn phần nổi phía trên).Sự phân tầng không đầy đủ là do hàm lượng axit nucleic và protein cao, có thể giải quyết vấn đề này bằng cách tăng lượng lysate sử dụng hoặc giảm lượng mẫu.Một bước chiết xuất chloroform đã được thêm vào mô mỡ.Có thể giảm sự mất mát RNA bằng cách bơm ngược hoặc bằng cách loại bỏ lớp hữu cơ sau khi ly tâm.Vấn đề lớn nhất với các phương pháp dựa trên ly tâm cột là lượng mẫu dư thừa.
Mẹo khai thác cổ điển
1. Tinh chế phenol: Thêm một thể tích bằng 1:1 Phenol/Chloroform và trộn mạnh trong 1-2 phút.Ly tâm ở tốc độ cao trong 2 phút.Cẩn thận loại bỏ phần nổi phía trên (80-90%).Không bao giờ đến lớp giữa.Một thể tích tương đương của dung dịch phản ứng có thể được thêm vào Phenol/Chloroform và loại bỏ phần nổi phía trên.Hai chất nổi trên bề mặt có thể được trộn lẫn với nhau để kết tủa axit nucleic nhằm cải thiện năng suất.Đừng quá nhẹ tay khi trộn và đừng cố gắng loại bỏ tất cả phần nổi phía trên.
2. Rửa bằng etanol 70-80%: Trong quá trình rửa, axit nucleic phải được làm lơ lửng để đảm bảo rửa sạch muối còn sót lại.Đồng thời, ngay sau khi rót hết etanol, tiến hành ly tâm ở tốc độ cao trong vài giây, sau đó dùng pipet loại bỏ phần etanol còn sót lại.Hòa tan sau khi để yên ở nhiệt độ phòng trong 5-10 phút.
11. Khai thác tổ chức đặc biệt
1. Mô sợi: Chìa khóa để trích xuất RNA từ mô sợi như tim/cơ xương là phá vỡ hoàn toàn mô.Những mô này có mật độ tế bào thấp, do đó lượng RNA trên một đơn vị trọng lượng của mô thấp và tốt nhất là sử dụng lượng ban đầu càng nhiều càng tốt.Đảm bảo nghiền kỹ mô trong điều kiện đông lạnh.
2. Các mô có hàm lượng protein/chất béo cao: hàm lượng chất béo não/thực vật cao.Sau khi trích xuất PCI, phần nổi phía trên chứa các bông trắng.Dịch nổi phải được chiết lại bằng cloroform.
3. Các mô có hàm lượng axit nucleic/ribozyme cao: lá lách/tuyến ức có hàm lượng axit nucleic và ribozyme cao.Nghiền mô trong điều kiện đông lạnh, sau đó là quá trình đồng nhất hóa nhanh chóng có thể vô hiệu hóa các ribozyme một cách hiệu quả.Tuy nhiên, nếu dịch ly giải quá nhớt (do hàm lượng axit nucleic cao), quá trình chiết xuất PCI sẽ không thể phân tầng hiệu quả;thêm nhiều lysate có thể giải quyết vấn đề này.Nhiều lần trích xuất PCI có thể loại bỏ nhiều DNA còn sót lại hơn.Nếu kết tủa trắng hình thành ngay sau khi thêm rượu, điều đó cho thấy DNA đã bị nhiễm bẩn.Chiết xuất lại bằng PCI có tính axit sau khi hòa tan có thể loại bỏ sự nhiễm bẩn DNA.
4. Mô thực vật: Mô thực vật phức tạp hơn mô động vật.Nói chung, thực vật được nghiền trong điều kiện nitơ lỏng, do đó sự phân hủy RNA bởi các enzym nội sinh là không phổ biến.Nếu vấn đề phân hủy không được giải quyết, thì gần như chắc chắn là do tạp chất có trong mẫu gây ra.Các tạp chất có trong nhiều loại thực vật sẽ dẫn đến cặn, và lý do tồn dư thường là do những tạp chất này có một số điểm tương đồng với RNA: bạn kết tủa và tôi kết tủa, bạn hấp phụ và tôi hấp phụ.Những đặc điểm này xác định rằng chúng là chất ức chế enzyme rất mạnh.
Hiện tại, thuốc thử chiết xuất RNA thương mại có thể thích ứng với hầu hết các mô động vật với những điều chỉnh nhỏ, nhưng có rất ít thuốc thử chiết xuất RNA thương mại có thể phù hợp với hầu hết các mô thực vật.May mắn thay, Foregene có thể cung cấp đặc biệtbộ chiết RNA thực vật, chúng ta cóBộ phân lập RNA tổng số thực vật, Plant Total RNA Isolation kit Plus.Loại thứ hai được thiết kế đặc biệt cho các loại cây có hàm lượng polysacarit và polyphenol cao.Đối với việc trích xuất RNA, phản hồi từ người dùng trong phòng thí nghiệm là đặc biệt tốt.
12. Ảnh hưởng của việc đông lạnh và rã đông mẫu Mẫu đông lạnh có thể lớn hơn và cần được cắt ra trước khi sử dụng để tách chiết RNA.Các mẫu có xu hướng tan chảy (có thể một phần) trong quá trình cắt.Các mẫu đông lạnh có thể cần được cân trước khi chiết xuất RNA và quá trình rã đông chắc chắn sẽ diễn ra trong quá trình này.Đôi khi, sự tan băng của mẫu cũng xảy ra trong quá trình nghiền nitơ lỏng;hoặc mẫu đông lạnh được thêm trực tiếp vào dịch ly giải mà không cần nghiền nitơ lỏng và quá trình tan băng chắc chắn sẽ xảy ra trước khi đồng nhất hóa hoàn toàn.Các thí nghiệm đã chỉ ra rằng mô đông lạnh dễ bị phân hủy RNA hơn trong quá trình rã đông so với mô tươi.Lý do có thể là: Quá trình đóng băng-rã đông phá vỡ các cấu trúc bên trong tế bào, giúp các enzym nội sinh tiếp xúc trực tiếp với RNA dễ dàng hơn.
13. Đánh giá chất lượng RNA Thông thường, điện di được sử dụng để đánh giá tính toàn vẹn của RNA và A260/A280 được sử dụng để đánh giá độ tinh khiết của RNA.Về lý thuyết, RNA nguyên vẹn có tỷ lệ 28S:18S = 2,7:1 và hầu hết dữ liệu đều nhấn mạnh tỷ lệ 28S:18S = 2:1.Thực tế là hầu như không có RNA nào được chiết xuất từ các mẫu ngoài tế bào theo tỷ lệ 2:1 (điều này thu được bằng cách sử dụng Máy phân tích sinh học Agilent).
Kết quả điện di của RNA bị ảnh hưởng bởi nhiều yếu tố, bao gồm cấu trúc thứ cấp, điều kiện điện di, lượng mẫu, mức độ bão hòa của EB, v.v. Sử dụng điện di tự nhiên để phát hiện RNA và sử dụng DNA Marker làm đối chứng.Nếu 28S ở 2kb và 18S ở 0,9kb là rõ ràng và 28S: 18S > 1, thì tính toàn vẹn có thể đáp ứng yêu cầu của hầu hết các thử nghiệm tiếp theo.
A260/A280 là một chỉ số gây ra nhiều nhầm lẫn.Trước hết, cần làm rõ ý nghĩa ban đầu của chỉ số này đối với axit nucleic: RNA tinh khiết, A260/280 của nó = khoảng 2,0.RNA tinh khiết là 'nguyên nhân' và A260/A280 = 2 là 'hiệu ứng'.Bây giờ mọi người đều lấy A260/A280 làm 'nguyên nhân', nghĩ rằng “nếu A260/A280 = 2 thì RNA là tinh khiết”, điều này đương nhiên dẫn đến nhầm lẫn.
Nếu quan tâm, bạn có thể thêm một ít thuốc thử thường được sử dụng trong chiết xuất, chẳng hạn như phenol, guanidine isothiocyanate, PEG, v.v., vào mẫu RNA của bạn, sau đó đo tỷ lệ A260/A280.Thực tế là nhiều thuốc thử được sử dụng để chiết xuất RNA, cũng như nhiều tạp chất trong mẫu, hấp thụ khoảng A260 và A280, ảnh hưởng đến A260/A280.
Phương pháp mang tính hướng dẫn nhất hiện nay là quét các mẫu RNA trong phạm vi 200-300nm.Đường cong của RNA tinh khiết có các đặc điểm sau: đường cong trơn tru, A230 và A260 là hai điểm uốn, A300 gần bằng 0, A260/A280 = khoảng 2,0 và A260/A230 = khoảng 2,0.Nếu không có sẵn dữ liệu quét, tỷ lệ A260/A230 cũng phải được xác định, vì tỷ lệ này nhạy cảm hơn với việc mang theo tất cả các tạp chất ảnh hưởng đến phản ứng enzym.Tính đến phạm vi tuyến tính của thiết bị (0,1–0,5 đối với A260).
Có hai hiện tượng hữu ích khác: tỷ lệ sẽ thấp hơn khoảng 0,3 khi A260/A280 được đo trong nước;trong khi tỷ lệ đo được trong 10 mM EDTA cao hơn khoảng 0,2 so với tỷ lệ đo được trong 1 mM EDTA.
Những sảm phẩm tương tự:
Nhà sản xuất và cung cấp Bộ công cụ phân lập RNA tổng số thực vật Trung Quốc |Foregene (foreivd.com)
Chuỗi phân lập RNA – Foregene Co., Ltd. (foreivd.com)
Thời gian đăng: 15-07-2022
