Câu hỏi thường gặp dành choBộ phân lập RNA tổng số động vật

Các phân tích sau đây về các vấn đề bạn có thể gặp phải trongchiết xuất RNA mô / tế bào động vật will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

RNA không được chiết xuất hoặc năng suất RNA thấp

Thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến hiệu suất thu hồi, chẳng hạn như: hàm lượng RNA mẫu mô, phương pháp vận hành, thể tích rửa giải, v.v.

1. Quá trình ly tâm trong bể nước đá hoặc đông lạnh (4 °C) được thực hiện trong quá trình vận hành.

Khuyến nghị: Vận hành ở nhiệt độ phòng (15-25°C) trong suốt quá trình, không ngâm nước đá và ly tâm ở nhiệt độ thấp.

2. Bảo quản mẫu không đúng cách hoặc quá thời gian bảo quản mẫu.

Khuyến nghị: Bảo quản mẫu ở -80 °C hoặc làm đông lạnh trong nitơ lỏng và tránh sử dụng nhiều lần làm đông lạnh-rã đông;cố gắng sử dụng mô tươi hoặc tế bào nuôi cấy để tách chiết RNA.

3. Ly giải mẫu không đủ.

Khuyến nghị: Khi đồng nhất hóa mô, hãy đảm bảo rằng mô được đồng nhất hóa đầy đủ và các tế bào mô được phân chia đủ để giải thích sự giải phóng RNA.

4. Dung dịch rửa giải không được thêm chính xác.

Khuyến nghị: Xác nhận rằng ddH không chứa RNase₂O được thêm từng giọt vào giữa màng cột tinh chế.

5. Thể tích chính xác của etanol tuyệt đối đã không được thêm vào Dung dịch đệm RL2 hoặc Dung dịch đệm RW2.

Khuyến nghị: Làm theo hướng dẫn, thêm đúng lượng ethanol tuyệt đối vào Buffer RL2 và Buffer RW2 và trộn đều trước khi sử dụng bộ kit.

6. Liều lượng mẫu mô không phù hợp.

Khuyến nghị: Sử dụng 10-20 mg mô hoặc (1-5) × 10⁶tế bào trên mỗi 500 μl đệm RL1, vì việc sử dụng quá nhiều mô có thể dẫn đến giảm chiết xuất RNA.

7. Thể tích rửa giải không đúng hoặc rửa giải không đầy đủ.

Khuyến nghị: Thể tích rửa giải của cột tinh chế là 50-200 μl;nếu hiệu quả rửa giải không đạt yêu cầu, nên kéo dài thời gian đặt ở nhiệt độ phòng sau khi thêm ddH không chứa RNase đã được làm nóng trước₂O, ví dụ như trong 5-10 phút.

8. Cột tinh chế có cặn ethanol sau khi rửa Buffer RW2.

Khuyến nghị: Nếu có dư lượng ethanol sau khi rửa Buffer RW2, hãy ly tâm ống rỗng trong 1 phút, thời gian cho quá trình ly tâm ống rỗng có thể tăng lên 2 phút hoặc cột tinh chế có thể được đặt ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để loại bỏ hoàn toàn lượng ethanol còn lại.

RNA tinh khiết bị thoái hóa

Chất lượng của RNA tinh khiết có liên quan đến các yếu tố như bảo quản mẫu, nhiễm RNase và thao tác, v.v.

1. Mẫu mô không được lưu giữ kịp thời.

Khuyến nghị: Nếu các mẫu mô hoặc tế bào không được sử dụng kịp thời sau khi thu thập, hãy bảo quản lạnh ngay lập tức ở -80 °C hoặc nitơ lỏng.Để chiết xuất RNA, hãy sử dụng mẫu mô hoặc tế bào mới được lấy bất cứ khi nào có thể.

2. Làm đông-rã đông lặp đi lặp lại các mẫu mô.

Khuyến nghị: Khi lưu trữ các mẫu mô, tốt nhất nên cắt chúng thành các mảnh nhỏ để bảo quản và loại bỏ một trong các mảnh đó khi sử dụng chúng để tránh mẫu bị đóng băng nhiều lần và sự phân hủy của RNA.

3. RNase được giới thiệu hoặc không đeo găng tay, mặt nạ dùng một lần, v.v. trong quá trình hoạt động.

Khuyến nghị: Các thí nghiệm tách chiết RNA được thực hiện tốt nhất trong các phòng thao tác RNA riêng biệt và bàn được dọn sạch trước khi thực hiện thí nghiệm.

Đeo găng tay và khẩu trang dùng một lần trong suốt quá trình thí nghiệm để giảm thiểu sự phân hủy RNA do đưa RNase vào.

4. Thuốc thử bị nhiễm RNase trong quá trình sử dụng.

Khuyến nghị: Thay thế bằng Bộ tách RNA tổng số động vật mới cho các thí nghiệm liên quan.

5. Các ống ly tâm, đầu tip, v.v. được sử dụng trong thao tác RNA bị nhiễm RNase.

Khuyến nghị: Xác nhận rằng các ống ly tâm, đầu tip, pipet, v.v. được sử dụng trong chiết xuất RNA đều không chứa RNase.

RNA thu được tinh khiết ảnh hưởng đến các thí nghiệm xuôi dòng

RNA được tinh chế bằng cột tinh chế, nếu hàm lượng ion muối, protein quá lớn sẽ ảnh hưởng đến thí nghiệm xuôi dòng, chẳng hạn như: phiên mã ngược, Northern Blot et al.

1. RNA rửa giải có dư lượng ion muối.

Khuyến nghị: Xác nhận rằng lượng etanol chính xác đã được thêm vào Bộ đệm RW2 và thực hiện 2 lần rửa cột tinh chế ở tốc độ ly tâm được chỉ định cho hoạt động;nếu có bất kỳ dư lượng ion muối nào, hãy để cột tinh chế trong Bộ đệm RW2 trong 5 phút ở nhiệt độ phòng và thực hiện ly tâm để tối đa hóa việc loại bỏ nhiễm bẩn muối.

2. Dư lượng ethanol trong RNA rửa giải.

Khuyến nghị: Xác nhận rằng sau khi rửa dung dịch đệm RW2, hãy thực hiện thao tác ly tâm ống rỗng ở tốc độ ly tâm được chỉ định để vận hành, tăng thời gian của thao tác ly tâm ống rỗng lên 2 phút nếu vẫn còn cặn etanol hoặc để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút sau khi ly tâm ống rỗng để tối đa hóa việc loại bỏ cặn etanol.

Phân lập các loại mẫu axit nulceic

Bộ dụng cụ Phân lập RNA của Foregene có thể thu được phân lập/chiết xuất RNA tổng số từ các nguồn mẫu sau: Mô động vật, thực vật, tế bào, virus, máu, v.v.

Làm thế nào để tôi lưu trữ các bộ

Bảo quản nhiệt độ phòng trong 24 tháng.