RNase là một từ nhạy cảm mà nhiều sinh viên thường tiến hành các thí nghiệm tách chiết RNA không muốn nghe.Được trang bị đầy đủ, RNA cuối cùng được chiết xuất bằng thuốc thử có độc tính cao phenol và chloroform đã bị phân hủy.Tôi không hòa giải!!!Hôm nay, chúng ta hãy xem nguồn gốc của Rnase nổi tiếng.

Ribonuclease (RNase), hoặc RNase, là một nuclease có thể thủy phân RNA thành các phân tử nhỏ.RNase, với tư cách là một protein phân tử nhỏ, ổn định một cách bất thường .Khử trùng bằng hơi nước áp suất cao và nhiệt độ cao thông thường và các chất ức chế protein không thể vô hiệu hóa hoàn toàn nó.Sự ổn định của RNase chủ yếu đến từ các liên kết disulfide trong cấu trúc.Ví dụ, RNase thường được sử dụng của tuyến tụy bò chỉ có 124 axit amin, nhưng chứa 4 liên kết disulfide.Liên kết lưu huỳnh và liên kết disulfide mang lại cho RNase tính ổn định nhiệt tuyệt vời.Ngoài ra, rnase có trọng lượng phân tử tương đối nhỏ và có thể nhanh chóng khôi phục lại hình dạng ban đầu trong nhiều trường hợp.

Ngoài việc cực kỳ ổn định,RNase có mặt khắp nơi trong phòng thí nghiệm .RNase là một cơ chế bảo vệ sinh học.Đối với một tế bào, RNA ngoại sinh thường gây tử vong.So với DNA ngoại sinh, RNA ngoại sinh thường nguy hiểm hơn.RNA được phiên mã và dịch mã một cách vui vẻ, vì vậy hầu hết tất cả các sinh vật đều đã tiến hóa RNase để bảo vệ chống lại sự xâm nhập của RNA ngoại sinh.Do đó, các tế bào vi khuẩn được nuôi cấy trong phòng thí nghiệm và bạn chiết xuất RNA tỏa ra mùi thơm của RNase.Dịch cơ thể con người (nước bọt, nước mắt, v.v.) chứa một lượng lớn RNase, vì vậy đừng khóc khi RNA bị phân hủy.Bạn càng khóc, quá trình thoái hóa RNA càng tồi tệ!!Chị Daiyu không thích hợp để chiết xuất RNA!

Ngoài ra, làn da mỏng manh của bạn cũng chứa rất nhiều RNase và bút đánh dấu, pipet, cửa tủ lạnh và tay nắm cửa đã chạm vào da cũng chứa RNase.

Lan man nhiều rồi, chúng ta cùng xem qua cách xử lý của RNases nhé.

Điều đầu tiên mà mọi người nghĩ đến khi loại bỏ RNA làSở GD&ĐT(dietyl pyrocacbonat).DEPC chủ yếu làm biến tính protein bằng cách kết hợp với vòng imidazole của nhóm hoạt động RNase histidine, do đó ức chế hoạt động của enzyme.0,1% DEPC có thể có tác dụng loại bỏ Rnase tốt hơn, nhưng chúng ta cần chú ý rằng DEPC là chất gây ung thư đã được biết đến, vì vậy cần đặc biệt chú ý khi sử dụng.

Đối với RNase, chúng ta cần bắt đầu từ hai khía cạnh,đầu tiên là ức chế hoạt động của RNase nội sinh

Các thuốc thử chiết RNA thông thường như guanidine isothiocyanate và DTT có trong Trizol có thể mở liên kết disulfide của RNase, nhưng vẫn có một số RNase, đặc biệt là trong các mẫu mô, vì vậy hãy chú ý đến nhiệt độ thấp.

1.Nhúng ngay mẫu mô vào nitơ lỏng sau khi lấy ra, hoặc trong dung dịch bảo quản RNA thương mại.

2.Sau khi chiết xuất RNA của mẫu tế bào, thêm nó vào dung dịch ly giải và ly giải nó trên hộp đá

3. Tốt nhất là sử dụng nitơ lỏng để mài khi các mẫu mô được đồng nhất hóa.Khi sử dụng bộ đồng nhất điện không có nitơ lỏng, hãy chú ý làm mát hoàn toàn bộ chuyển đổi đồng nhất trước.

Thứ hai là DNase ngoại sinh

1.Trang bị đầy đủ vũ khí, mặc áo khoác phòng thí nghiệm, đeo khẩu trang và nhớ đeo một đôi găng tay mới (đừng tiết kiệm quá nhé!! Cần lưu ý rằng Trizol siêu ăn mòn và cũng rất mạnh qua găng tay nên đừng nhỏ giọt lên tay).

2.Tất cả các đầu pipet, ống EP, ống PCR và các thiết bị khác đã sử dụng phải được xử lý khử RNA.Nó có thể được ngâm trong 0,1% DEPC và sau đó được nén dưới áp suất cao.Hãy chú ý đến hoạt động trong tủ hút.Bạo chúa địa phương có thể trực tiếp mua vật tư tiêu hao để loại bỏ enzyme.

PS: Hãy để tôi nói cho bạn một phương pháp lười biếng.Mặc dù nhiệt độ cao và áp suất cao không thể loại bỏ hoàn toàn RNase nhưng sẽ loại bỏ được một phần lớn.2 lần nhiệt độ cao và áp suất cao có tác dụng tốt, việc chiết RNA ít ảnh hưởng.

3.Rượu có thể làm biến tính protein,vì vậy bảng chiết xuất RNA có thể được lau bằng cồn 75% , và găng tay cũng có thể được phun cồn.

4.Dung dịch hòa tan RNA cuối cùng và ống ly tâm cũng phải được xử lý khử RNA.Nước DEPC là dung dịch hòa tan RNA thường được sử dụng.Hãy nói về phương pháp chuẩn bị đúng của nước DEPC (hãy nhớ đóng gói lại DEPC thương mại khi bạn mua nó)

Thêm DEPC vào nước siêu tinh khiết theo tỷ lệ 1:1000, lắc đều, để yên qua đêm ở 37°C và khử trùng ở 121°C dưới nhiệt độ cao và áp suất cao trong 15 phút.Nước DEPC có thể được bảo quản ở -20°C trong các phần 1ml.

Cuối cùng, tóm lại: nhiệt độ thấp là chìa khóa, vật tư tiêu hao được xử lý tốt, trang bị đầy đủ và ít nói hơn!

Chà, đó là chiến lược của ngày hôm nay.Chúc bạn đạt được nồng độ và độ tinh khiết của RNA mà bạn đã đề cập.Cả A260/A280 đều là 2.0!!!

Tất nhiên, nếu bạn sử dụng mộthoạt động ở nhiệt độ phòng bộ chiết RNA, bạn có thể không gặp phải những rắc rối trên.

Hoạt động ở nhiệt độ phòng, không cần thêm DNase, chiết xuất RNA tổng số từ tế bào trong 11 phút và chiết xuất RNA tổng số từ mô động vật hoặc thực vật trong 30 phút.

Đối với các mẫu dùng thử, xin vui lòng liên hệ:overseas@foregene.com

Những sảm phẩm tương tự:

https://www.foreivd.com/cell-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/animal-total-rna-isolation-kit-product/

https://www.foreivd.com/plant-total-rna/