Kháng thể, còn được gọi là globulin miễn dịch (Ig), là glycoprotein liên kết đặc hiệu với kháng nguyên.
 
Chuẩn bị kháng thể thông thường được sản xuất bằng cách gây miễn dịch cho động vật và thu thập kháng huyết thanh.Do đó, kháng huyết thanh thường chứa các kháng thể chống lại các kháng nguyên không liên quan khác và các thành phần protein khác trong huyết thanh.Các phân tử kháng nguyên nói chung chủ yếu chứa nhiều epitop khác nhau, vì vậy các kháng thể thông thường cũng là một hỗn hợp các kháng thể chống lại nhiều epitop khác nhau.Ngay cả các kháng thể huyết thanh thông thường chống lại cùng một epitope vẫn bao gồm các kháng thể không đồng nhất được tạo ra bởi các dòng tế bào B khác nhau.Do đó, kháng thể huyết thanh thông thường còn được gọi là kháng thể đa dòng, hay gọi tắt là kháng thể đa dòng.
 
Kháng thể đơn dòng (kháng thể đơn dòng) là một kháng thể có tính đồng nhất cao được tạo ra bởi một dòng tế bào B duy nhất và chỉ chống lại một epitope cụ thể.Nó thường được điều chế bằng công nghệ tế bào lai—công nghệ kháng thể tế bào lai dựa trên công nghệ dung hợp tế bào, kết hợp tế bào B có khả năng tiết ra kháng thể đặc hiệu và tế bào u tủy có khả năng phát triển vô hạn thành tế bào lai tế bào B.Tế bào hybridoma này có các đặc tính của tế bào mẹ.Nó có thể sinh sôi nảy nở vô tận và bất tử trong ống nghiệm giống như các tế bào u tủy, đồng thời nó có thể tổng hợp và tiết ra các kháng thể đặc hiệu giống như các tế bào lympho lách.Thông qua quá trình nhân bản vô tính, có thể thu được một dòng đơn dòng từ một tế bào lai đơn lẻ, tức là một dòng tế bào lai.Các kháng thể mà nó tạo ra là các kháng thể có tính đồng nhất cao chống lại cùng một yếu tố quyết định kháng nguyên, đó là các kháng thể đơn dòng.
 
Kháng thể tồn tại dưới dạng một hoặc nhiều đơn phân hình chữ Y (nghĩa là kháng thể đơn dòng hoặc kháng thể đa dòng).Mỗi monome hình chữ Y được cấu tạo từ 4 chuỗi polipeptit, trong đó có 2 chuỗi nặng giống nhau và 2 chuỗi nhẹ giống nhau.Chuỗi nhẹ và chuỗi nặng được đặt tên theo trọng lượng phân tử của chúng.Đỉnh của cấu trúc hình chữ Y là vùng biến đổi, là vị trí gắn kháng nguyên.(Trích từ Khái niệm kháng thể đơn dòng sinh học Detai)
 
cấu trúc kháng thể
Dây xích nặng
Có năm loại chuỗi nặng Ig ở động vật có vú, được đặt tên bằng các chữ cái Hy Lạp là α, δ, ε, γ và μ.Các kháng thể tương ứng được gọi là IgA, IgD, IgE, IgG và IgM.Các chuỗi nặng khác nhau có kích thước và thành phần khác nhau.α và γ chứa khoảng 450 axit amin, trong khi μ và ε chứa khoảng 550 axit amin.
Mỗi chuỗi nặng có hai vùng: vùng hằng định và vùng biến đổi.Tất cả các kháng thể cùng loại đều có cùng một vùng cố định, nhưng có sự khác biệt giữa các kháng thể khác loại.Các vùng cố định của chuỗi nặng γ, α và δ bao gồm ba miền Ig song song với vùng bản lề để tăng tính linh hoạt của nó;các vùng cố định của chuỗi nặng μ và ε bao gồm 4 miền Ig.Vùng biến đổi của chuỗi nặng của kháng thể được tạo ra bởi các tế bào B khác nhau là khác nhau, nhưng vùng biến đổi của kháng thể được tạo ra bởi cùng một tế bào B hoặc dòng tế bào là giống nhau và vùng biến đổi của mỗi chuỗi nặng có chiều dài khoảng 110 axit amin., Và tạo thành một miền Ig duy nhất.
 
Chuỗi ánh sáng
Chỉ có hai loại chuỗi nhẹ ở động vật có vú: loại lambda và loại kappa.Mỗi chuỗi nhẹ có hai miền liên kết: vùng hằng định và vùng biến đổi.Độ dài của chuỗi nhẹ là khoảng 211~217 axit amin.Hai chuỗi nhẹ chứa trong mỗi kháng thể luôn giống nhau.Đối với động vật có vú, chuỗi nhẹ trong mỗi kháng thể chỉ có một loại: kappa hoặc lambda.Ở một số động vật có xương sống bậc thấp, chẳng hạn như cá sụn (cartilage fishes) và cá xương, người ta cũng tìm thấy các loại chuỗi nhẹ khác như loại iota (iota).
 
phân khúc Fab và Fc
Đoạn Fc có thể kết hợp trực tiếp với enzym hoặc thuốc nhuộm huỳnh quang để đánh dấu kháng thể.Đây là phần mà kháng thể bám vào đĩa trong quá trình ELISA, đồng thời cũng là phần mà kháng thể thứ hai được nhận biết và gắn kết trong quá trình kích thích miễn dịch, tạo mô miễn dịch và hóa mô miễn dịch.Các kháng thể có thể bị thủy phân thành hai đoạn F(ab) và một đoạn Fc bởi các enzym phân giải protein như papain, hoặc chúng có thể bị pepsin bẻ gãy khỏi vùng bản lề và bị thủy phân thành một đoạn F(ab)2 và một đoạn Fc.Các mảnh kháng thể IgG đôi khi rất hữu ích.Do thiếu đoạn Fc, đoạn F(ab) sẽ không kết tủa với kháng nguyên, cũng như không bị các tế bào miễn dịch bắt giữ trong các nghiên cứu in vivo.Do các mảnh phân tử nhỏ và thiếu chức năng liên kết ngang (do thiếu phân đoạn Fc), phân đoạn Fab thường được sử dụng để đánh dấu phóng xạ trong các nghiên cứu chức năng và phân đoạn Fc chủ yếu được sử dụng làm chất chặn trong nhuộm hóa mô.
 
Vùng thay đổi và vùng không đổi
Vùng biến đổi (vùng V) nằm ở 1/5 hoặc 1/4 (chứa khoảng 118 gốc axit amin) của chuỗi H gần đầu tận cùng N và 1/2 (chứa khoảng 108-111 gốc axit amin) gần đầu cùng N của chuỗi L.Mỗi vùng V có một vòng peptit được hình thành bởi các liên kết disulfua trong chuỗi và mỗi vòng peptit chứa khoảng 67 đến 75 gốc axit amin.Thành phần và sự sắp xếp của các axit amin trong vùng V xác định tính đặc hiệu liên kết kháng nguyên của kháng thể.Do các loại và trình tự axit amin trong vùng V luôn thay đổi, nhiều loại kháng thể với các đặc tính kháng nguyên liên kết khác nhau có thể được hình thành.Vùng V của chuỗi L và chuỗi H lần lượt được gọi là VL và VH.Ở VL và VH, thành phần và trình tự axit amin của một số vùng địa phương có mức độ biến đổi cao hơn.Những vùng này được gọi là vùng siêu biến (HVR).Thành phần axit amin và sự sắp xếp của các phần không phải HVR trong vùng V tương đối bảo thủ, vùng này được gọi là vùng khung.Có ba vùng siêu biến trong VL, thường nằm ở gốc axit amin lần lượt là 24 đến 34 và 89 đến 97.Ba HVR của VL và VH lần lượt được gọi là HVR1, HVR2 và HVR3.Nghiên cứu và phân tích nhiễu xạ tinh thể tia X đã chứng minh rằng vùng siêu biến thực sự là nơi kháng nguyên kháng thể liên kết, vì vậy nó được gọi là vùng xác định bổ sung (CDR).HVR1, HVR2 và HVR3 của VL và VH có thể được gọi tương ứng là CDR1, CDR2 và CDR3.Nói chung, CDR3 có mức độ siêu biến đổi cao hơn.Vùng siêu biến đổi cũng là vị trí chính tồn tại các yếu tố quyết định ngu ngốc của các phân tử Ig.Trong hầu hết các trường hợp, chuỗi H đóng vai trò quan trọng hơn trong việc liên kết với kháng nguyên.
Vùng cố định (vùng C)nằm ở 3/4 hoặc 4/5 (khoảng từ axit amin 119 đến đầu C) của chuỗi H gần đầu C và 1/2 (chứa khoảng 105 gốc axit amin) gần đầu C của chuỗi L.Mỗi vùng chức năng của chuỗi H chứa khoảng 110 gốc axit amin và chứa một vòng peptit bao gồm 50-60 gốc axit amin được nối với nhau bằng liên kết disulfua.Thành phần và sự sắp xếp axit amin của vùng này tương đối ổn định trong cùng một chuỗi Ig isotype L của động vật và cùng một chuỗi H.Giống nhau, nó chỉ có thể liên kết đặc hiệu với kháng nguyên tương ứng, nhưng cấu trúc vùng C của nó giống nhau, nghĩa là nó có cùng tính kháng nguyên.Có thể kết hợp kháng thể thứ cấp IgG của ngựa với người (hoặc kháng thể kháng) với cả hai Sự kết hợp của các kháng thể (IgG) chống lại các ngoại độc tố khác nhau xảy ra.Đây là cơ sở quan trọng để chuẩn bị các kháng thể thứ cấp và áp dụng fluorescein, đồng vị, enzyme và các kháng thể được đánh dấu khác.
 
 
Những sảm phẩm tương tự:
Bộ RT-qPCR trực tiếp cho tế bào