Mẹo để cải thiện khả năng phục hồi keo

1. Tăng lượng mẫu trong quá trình điện di.

2. Sử dụng đệm điện di mới chuẩn bị.

3. Khi cắt keo, cố gắng chỉ cắt keo có dải để giảm khối lượng cắt keo: không cần keo có ít mảnh chuyên dụng, nếu không sẽ ảnh hưởng đến tốc độ thu hồi.

4. Sau khi làm tan chảy hai hoặc nhiều miếng keo, sử dụng một ống bất kể thể tích lớn như thế nào và chuyển chúng vào cùng một cột.

5. Dung dịch được thêm vào trong sol có thể nhiều hơn một chút, điều này có lợi hơn cho việc gắn DNA vào màng, nhưng nói chung không vượt quá 750ul.

6. Chìa khóa để thu hồi gel là gắn DNA vào cột thông qua nồng độ muối, độ axit (điện tích) và tính kỵ nước của dung dịch trong cột.Do đó, nếu độ pH của dung dịch đệm điện di quá cao, có thể thêm 10ul (pH 5,0, 3mol/L NaAC) vào dung dịch;để đánh chặn tốt hơn các phân tử DNA trên màng, có thể thêm 30% isopropanol đun nóng vào chất lỏng sau khi hòa tan keo.

7. Trước khi thêm dung dịch rửa giải, để cột ở nhiệt độ phòng trong vài phút (khoảng 10 phút) để etanol bay hơi hoàn toàn.

8. Cuối cùng, thêm ít dung dịch rửa giải để giảm thiểu thể tích thu hồi.Thông thường, 30-50μl dung dịch rửa giải được sử dụng để rửa giải (không quá ít, nếu không sẽ không thể làm ướt màng, không có lợi cho quá trình rửa giải);các giọt rửa giải nằm ở trung tâm của màng, để rửa giải hoàn toàn DNA liên kết với màng.

9. Sau khi thêm chất rửa giải, có thể rửa giải trong bể nước 55 độ trong 5 phút hoặc đặt trong bể nước 50 độ trong hơn 10 phút, hoặc bịt kín bằng parafilm ở 4 độ qua đêm, sau đó ly tâm để phục hồi vào ngày hôm sau, hiệu quả tốt.

10.Thêm dịch rửa giải ly tâm trở lại cột hấp phụ và ly tâm lại.

Các phương pháp và quy trình chi tiết để thu hồi sản phẩm PCR

1. Tái chế cao su thông thường

Nếu bạn muốn thu hồi keo, tốt nhất nên sử dụng bộ dụng cụ, tiện lợi và tỷ lệ thu hồi cao hơn một chút.Nếu bạn thực sự cần phục hồi thủ công, bạn có thể thêm 3 lần thể tích TE sau khi cắt keo.Sau khi tan chảy trong bể nước, phenol, phenol/chloroform được chiết xuất sạch và etanol được kết tủa.Đó là nó.

2. Phục hồi DNA từ gel có điểm nóng chảy thấp

Tinh chế các đoạn DNA Thêm TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8.0, 0,1 mmol/l EDTA) bằng với thể tích của gel và đặt vào bể nước 65°C trong 5 phút để gel hòa tan hoàn toàn.

Sau khi được đưa về nhiệt độ phòng, một lượng phenol tương đương (đã bão hòa với TE, TE được niêm phong ở lớp trên và lớp phenol phía dưới được loại bỏ) được thêm vào và hỗn hợp này được trộn nhẹ nhàng (không cần trộn), và ly tâm ở tốc độ 12.000 vòng / phút trong 3 phút.Lặp lại 1-2 lần.

Lấy phần nổi phía trên, thêm 0,1 thể tích natri axetat 3mol/L (pH 5,2) và 2,5 lần thể tích etanol tuyệt đối để tiến hành kết tủa etanol.Hòa tan DNA tinh khiết với một lượng TE thích hợp, đo hàm lượng và chuẩn bị sử dụng (nó có thể được sử dụng để phân tích cấu trúc gen đích, chuẩn bị mẫu dò, v.v.).

3. Phục hồi PCR với độ đặc hiệu khuếch đại tốt

Nếu độ đặc hiệu của khuếch đại PCR tốt thì nó chỉ là quá trình tinh sạch và thu hồi sản phẩm PCR đơn giản.Bạn có thể thêm 50ug/ml proteinase K vào sản phẩm PCR, 37 độ trong 1 giờ, chiết một lần bằng phenol/chloroform, chiết một lần bằng chloroform và thêm 0,1 thể tích dịch nổi phía trên.Natri axetat được thu hồi bằng kết tủa với 2,5 thể tích etanol tuyệt đối.

Những sảm phẩm tương tự:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/