Các phương pháp PCR và ô nhiễm aerosol axit nucleic trong phòng thí nghiệm xét nghiệm axit nucleic giống như hai mặt của một đồng xu.Chúng ta chỉ có thể chọn có hay không, chứ không thể chọn muốn hay tiêu.

1. Sàng lọc loại bỏ DNA

Để đạt được việc loại bỏ không gian ô nhiễm sol khí axit nucleic, trước tiên cần sàng lọc các chất tẩy DNA có thể loại bỏ axit nucleic ở trạng thái lỏng.Bởi vì không có nhiều loại bỏ DNA thực sự hiệu quả.Về phương pháp thí nghiệm, mời bạn tham khảo: Máy tách ADN không thể là “góc bí mật” của phòng thí nghiệm!

Trong thí nghiệm này, 100 bản sao/μL (CT khoảng 31) plasmid ASFV và chất tẩy DNA được định lượng bằng PCR kỹ thuật số được trộn với các thể tích bằng nhau, sau đó phản ứng ở nhiệt độ phòng trong 10 phút, 20 phút và 30 phút tương ứng.Sau khi chiết xuất axit nucleic, quá trình khuếch đại qPCR đã được thực hiện.Một kiểm soát tích cực trộn với plasmid và nước đã được so sánh.Vì thí nghiệm không được hoàn thành cùng một lúc nên có thể có sai lệch nhất định giữa các kết quả, nhưng điều đó không ảnh hưởng đến kết luận của thí nghiệm.Cho đến nay, tôi đã đánh giá 10 sản phẩm loại bỏ DNA thương mại.Chỉ các sản phẩm số 1, số 6 và số 8 mới có thể phân hủy DNA plasmid ở trạng thái lỏng một cách hiệu quả.Các sản phẩm khác hầu như không có tác dụng.

Bảng 1 Tác dụng loại bỏ axit nucleic của chất tẩy DNA có bán trên thị trường

2. Thí nghiệm tác dụng loại bỏ DNA của các chất khử trùng thông dụng

1. Sàng lọc các chất khử trùng thông dụng

Có nhiều loại chất khử trùng thường được sử dụng trong phòng thí nghiệm: andehit, phenol, rượu, muối amoni bậc bốn, peroxit, chế phẩm clo, axit và bazơ.Tác dụng khử trùng của các chất khử trùng này đối với vi sinh vật đã được thực nghiệm xác minh đầy đủ, nhưng không có đủ dữ liệu thực nghiệm về tác dụng phân hủy của axit nucleic.Các phòng thí nghiệm kiểm tra axit nucleic cần một chất khử trùng không chỉ có tác dụng khử trùng tốt đối với vi sinh vật mà còn có thể phân hủy DNA.Kết quả kiểm tra cho thấy, chỉ có 2 chế phẩm clo là 84 chất khử trùng và axit trichloroisocyanuric và axit clohydric 1 M đạt yêu cầu.Vì axit clohydric 1 M có tính ăn mòn cao, nên sử dụng các chế phẩm clo để xử lý chất thải trong các phòng thí nghiệm thử nghiệm axit nucleic.Tuy nhiên, các chế phẩm clo ăn mòn kim loại và không thể được sử dụng để khử trùng dụng cụ và thiết bị.

Bảng 2 Tác dụng loại bỏ DNA của các loại chất khử trùng khác nhau

2. Nồng độ hữu hiệu tối thiểu của chế phẩm clo

Chất khử trùng gốc clo có tác dụng phân hủy DNA mạnh, nhưng do tính ăn mòn và kích ứng kim loại, chúng có thể được sử dụng để lau sàn, mặt bàn phi kim loại, đầu ngâm, ống ly tâm và các vật dụng thử nghiệm khác.

Theo "Hướng dẫn kỹ thuật khử trùng dịch bệnh viêm phổi mạch vành mới": Chất gây ô nhiễm (máu, dịch tiết và chất nôn của bệnh nhân) clo có sẵn chất khử trùng chứa clo 5g/L-10g/L;sàn nhà, tường và các bề mặt đồ vật sử dụng clo có sẵn 1g/L Chất khử trùng clo: quần áo, khăn trải giường và các loại hàng dệt khác trước tiên được ngâm trong chất khử trùng clo có nồng độ clo 0,5g/L trong 30 phút, sau đó làm sạch như bình thường.

Bảng 3 Hiệu quả loại bỏ DNA của các nồng độ khác nhau của chất khử trùng clo

Kết quả thử nghiệm cho thấy: khi nồng độ clo hữu hiệu lớn hơn hoặc bằng 1,2 g/L, chất khử trùng chứa clo có thể phân hủy hoàn toàn 100 bản sao/μL plasmid khi được sử dụng trong 5 phút.Khi tác dụng trong 10 phút, 84 chất khử trùng có nồng độ clo hữu hiệu lớn hơn hoặc bằng 0,6 g/L có thể phân hủy hoàn toàn 100 bản sao/μL plasmid.

3. Thí nghiệm loại bỏ không khí bị ô nhiễm bởi sol khí axit nucleic

Làm thế nào để làm sạch không khí bị ô nhiễm bởi sol khí axit nucleic?Hầu hết các suy nghĩ là tạo ra một môi trường bị ô nhiễm sol khí và sau đó làm sạch nó hoặc làm sạch axit nucleic sau khi bị ô nhiễm.Đối với tôi, một thí nghiệm không thể lặp lại và kết quả của thí nghiệm không thể được phân tích định lượng là vô nghĩa, vì vậy tôi đã mượn một số phương pháp khử trùng không khí khử trùng.Xem "GB27948-2020 Yêu cầu chung đối với chất khử trùng không khí" và "Thông số kỹ thuật khử trùng"

1. Vật liệu thử nghiệm

1.1 Loại bỏ DNA: Trong thí nghiệm này, hai loại DNA loại bỏ có sẵn trên thị trường là 6 và 8 trong Bảng 1 đã được chọn.

1.2 Xét nghiệm plasmid: Xét thấy giá trị CT của hầu hết ô nhiễm trong phòng thí nghiệm sẽ cao hơn 30, nồng độ plasmid gen ASFV được sử dụng lần này là khoảng 100 bản sao / μL và CT PCR định lượng huỳnh quang là khoảng 31,07.Thêm plasmid vào tăm bông và để khô trong không khí.

1.3 Dụng cụ thử nghiệm: Dụng cụ khử trùng Bilingkehan KVBOX, được hỗ trợ bởi Công ty TNHH Công nghệ Môi trường Runlian Thâm Quyến, có hiệu suất khử trùng không khí tuyệt vời bằng chất khử trùng hydro peroxide và có thể tiêu diệt hiệu quả các bào tử và các vi sinh vật khác.

1.4 Không gian thử nghiệm: một cửa sổ chuyển nhượng kín khoảng 0,1 mét khối.

2. Phương pháp kiểm tra

Lượng chất khử trùng được đặt trên máy khử trùng là 10ml và nồng độ là 100ml/m3, cao hơn nhiều so với "GB27948-2020 Yêu cầu chung đối với chất khử trùng không khí": khi sử dụng khử trùng dạng phun khí dung, lượng chất khử trùng phải là ≤10 ml/m3