Gần đây, tôi phát hiện ra một điều tuyệt vời!Nhiều chuyên gia thí nghiệm cao cấp xung quanh anh ta thậm chí không biết một số điểm kiến ​​thức thí nghiệm rất cơ bản.

Ví dụ, bạn có thể trả lời các câu hỏi sau không?

Có sự khác biệt giữa OD260 và A260 không?mỗi nghĩa là gì?
OD là chữ viết tắt của mật độ quang (mật độ quang), A là chữ viết tắt của độ hấp thụ (độ hấp thụ), hai khái niệm này thực ra giống nhau, “mật độ quang” là “độ hấp thụ”, nhưng “mật độ quang” phù hợp với hầu hết các tiêu chuẩn quốc gia và tiêu chuẩn hóa hơn.

Thông thường chúng ta đo giá trị OD ở bước sóng 260nm để tính nồng độ axit nucleic, vậy 1OD biểu thị điều gì?
Axit nucleic có cực đại hấp thụ cực đại ở bước sóng 260nm, chứa cả DNA và RNA, cũng như các đoạn axit nucleic bị phân mảnh (đây là điểm mấu chốt).
Giá trị OD đo được ở bước sóng 260 nm được ghi là OD260.Nếu mẫu tinh khiết, giá trị OD260 có thể tính nồng độ của mẫu axit nucleic.
1 OD260=50 μg/ml dsDNA (DNA sợi kép)
=37 μg/ml ssDNA (ADN sợi đơn)
=40 µg/ml ARN
=30 μg/ml dNTP (oligonucleotide)
Có sự liên hệ và khác biệt nào giữa RT-PCR, Realtime-PCR và QPCR không?
RT-PCR là viết tắt của PCR phiên mã ngược
Real Time PCR=qPCR, viết tắt của Quantitative Real Time PCR
Mặc dù Real Time PCR (PCR định lượng huỳnh quang thời gian thực) và Reverse Transcript PCR (PCR phiên mã ngược) dường như đều được viết tắt là RT-PCR.Nhưng quy ước quốc tế là: RT-PCR đề cập cụ thể là PCR phiên mã ngược.

nt, bp và kb thường được sử dụng để mô tả chiều dài của DNA/RNA trong sinh học là gì?
nt = nuclêôtit
bp = cặp cơ sở cặp cơ sở
kb = kilobase

Tất nhiên, bạn sẽ nói rằng nhiều người không quan tâm đến những chi tiết nhỏ này!Mọi người đều làm điều này, và sẽ không ai hỏi bạn nó là gì.Bạn biết điều này là không cần thiết, phải không?

Không, không, không, rất cần thiết phải biết điều này!Do đó?
Bởi vì bạn muốn đăng một bài báo!Anh trai!Cho dù bạn đang nhắm mục tiêu tốt nghiệp hay theo đuổi thành tích nghiên cứu khoa học, bạn phải dựa vào các bài báo để nói!

Chiết xuất axit nucleic nên là thí nghiệm đơn giản và cơ bản nhất.Chất lượng chiết xuất axit nucleic quyết định trực tiếp đến kết quả của các thí nghiệm tiếp theo.

Dù đã nói nhiều lần nhưng vẫn có nhiều bạn không quan tâm.Lần này tôi quyết định chuyển ra khỏi bài viết!

Thông tin tối thiểu để công bố thí nghiệm PCR định lượng thời gian thực, gọi tắt là MIQE, là một bộ hướng dẫn thí nghiệm định lượng huỳnh quang được đưa ra trên phạm vi quốc tế, đề xuất các tiêu chuẩn tối thiểu cho thông tin thí nghiệm cần thiết để đánh giá các thí nghiệm PCR định lượng huỳnh quang và xuất bản các bài báo.Thông qua các điều kiện thí nghiệm và phương pháp phân tích do người thí nghiệm cung cấp, người đánh giá có thể đánh giá tốt hơn tính hợp lệ của sơ đồ thí nghiệm của nhà nghiên cứu.

Có thể thấy rằng trong phần khai thác axit nucleic, các hạng mục phát hiện sau đây đã được đề xuất,

“E” cho biết thông tin phải được cung cấp và “D” cho biết thông tin cần được cung cấp nếu cần thiết.

Hình thức rất phức tạp, thực ra tôi muốn nói rằng mọi người cần bắt đầu từ

độ tinh khiết (D), năng suất (D), tính toàn vẹn (E) và tính nhất quán (E) để đánh giá axit Nucleic theo bốn khía cạnh này.

Theo thói quen thực nghiệm, trước tiên xin nói về các phương pháp đánh giá độ tinh khiết và nồng độ.

Phép đo OD là phương pháp phát hiện yêu thích và dễ dàng nhất cho những người làm thí nghiệm.Về nguyên tắc, tôi sẽ không đi vào chi tiết ở đây.Hiện nay, nhiều phòng thí nghiệm sử dụng máy quang phổ siêu vi để phân tích định lượng trực tiếp các mẫu axit nucleic.Trong khi hiển thị giá trị độ hấp thụ, chương trình trực tiếp đưa ra giá trị nồng độ (axit nucleic, protein và thuốc nhuộm huỳnh quang) và các tỷ lệ liên quan.Đối với việc phân tích giá trị OD, hãy Lưu ảnh này và bạn sẽ ổn thôi.

Danh sách giải pháp giá trị OD phổ quát

Tuy nhiên, có một vài lưu ý cần được đưa ra riêng cho bạn.

(Sau tất cả, tôi biết bạn phải là người tiết kiệm và đợi cho đến khi bạn cần chúng!)

Lưu ý 1 Thiết bị

Giá trị OD sẽ bị ảnh hưởng bởi các thiết bị khác nhau.Miễn là OD260 nằm trong một phạm vi nhất định, thì các giá trị của OD230 và OD280 đều có ý nghĩa.Ví dụ, dải hấp thụ của Eppendorf D30 phổ biến ở 260nm là 0~3A và NanoDrop One của Thermo là ở 260nm.Phạm vi hấp thụ 0,5 ~ 62,5A.

Lưu ý 2thuốc thử pha loãng

Giá trị OD có thể bị ảnh hưởng bởi độ pha loãng của các thuốc thử khác nhau.Ví dụ: chỉ số OD260/280 của RNA tinh khiết trong pH7,5 10mM Trisbộ đệm nằm trong khoảng 1,9-2,1, trong khi ởdung dịch nước trung tínhtỷ lệ sẽ thấp hơn, có thể chỉ 1,8-2,0, nhưng điều này không có nghĩa là chất lượng RNA thay đổi.

lưu ý 3dư chất

Sự tồn tại của các chất còn sót lại sẽ ảnh hưởng đến độ chính xác của phép đo nồng độ axit nucleic, vì vậy cần tránh dư lượng protein, phenol, polysacarit và polyphenol trong các mẫu axit nucleic càng nhiều càng tốt.

Tuy nhiên, trên thực tế, chiết xuất bằng thuốc thử hữu cơ là một phương pháp cũ.Trong các bộ dụng cụ thương mại, hiệu quả chiết xuất có thể đạt được thông qua cột hấp phụ dựa trên silica kết hợp với quá trình ly tâm, tránh các thuốc thử hữu cơ độc hại và khó loại bỏ, v.v. Các vấn đề, chẳng hạn nhưBộ tách chiết axit nucleic của Foregene, không sử dụng DNase/RNase và các thuốc thử hữu cơ độc hại trong suốt quá trình vận hành, nhanh chóng và an toàn, vàhiệu quả làTốt(vô tình nói là hói, nhưng tôi biết bạn muốn biết).

Ví dụ 1: Năng suất và độ tinh khiết của chiết xuất DNA bộ gen

Foregene Soil DNA Isolation Kit (DE-05511) xử lý các mẫu đất từ ​​nhiều nguồn khác nhau, số lượng và độ tinh khiết của DNA bộ gen thu được được trình bày trong bảng sau:
Ví dụ 2: Hiệu suất và độ tinh khiết chiết xuất ARN mô

Animal Total RNA Isolation Kit (RE-03012) đã xử lý các mẫu mô khác nhau và số lượng cũng như độ tinh khiết của RNA thu được được trình bày trong bảng bên dưới (đối với mô của chuột):
Tuy nhiên, đừng nghĩ rằng bạn đã hoàn thành với giá trị OD.Bạn có quan tâm đến những điểm chính mà tôi đã vẽ cho bạn ở phía trước không?

Để ý

Các phân tử axit nucleic bị phân mảnh cũng sẽ được tính toán trong độ hấp thụ.Giả sử rằng bạn có dư lượng DNA bộ gen trong RNA, thì giá trị OD của bạn sẽ có vẻ rất cao, nhưng không thể xác định được nồng độ RNA thực tế.Liệu RNA của bạn có bị thoái hóa hay không vẫn chưa rõ ràng, vì vậy chúng tôi vẫn cần một phương pháp đánh giá toàn diện để đưa ra phán đoán chính xác hơn, đó là đánh giá tính toàn vẹn của axit nucleic được đề cập trong MIQE.