Thử nghiệm trong phòng thí nghiệm bắt đầu bằng việc lấy mẫu và việc lấy mẫu là cách dễ bị bỏ qua nhất.Điều quan trọng nhất đối với việc lấy mẫu là chọn đúng loại mẫu, sử dụng các công cụ lấy mẫu phù hợp và thực hiện vận chuyển và xử lý hợp lý.

I. Loại mẫu

Các loại mẫu phổ biến như sau:

Phương pháp lấy mẫu có thể tham khảo các thông số kỹ thuật để giám sát môi trường đối với vi-rút corona mới trong chợ (chợ) buôn bán nông sản”:

1. Mẫu tăm bông từ bệnh phẩm họng, tay, quần áo và các đồ vật khác của người hành nghề: phải sử dụng dung dịch bảo quản vi rút trong ống lấy mẫu vi rút và thấm hoàn toàn vào tăm bông lấy mẫu.mặt đất) được thi công và rửa đi rửa lại trên 3 lần.Đồng thời, cần thực hiện lấy mẫu phân tán đa điểm trên bề mặt đối tượng được lấy mẫu.

2. Mẫu tăm bông bề mặt thực phẩm: Không thể lấy trực tiếp mẫu thực phẩm.Thực phẩm được lấy phải được tách cẩn thận và bảo quản trong túi lấy mẫu sạch trước khi lấy mẫu tăm bông.Phải sử dụng dung dịch bảo quản vi-rút trong ống lấy mẫu vi-rút, sau khi ngâm hoàn toàn tăm bông lấy mẫu, liên tục bôi và rửa bề mặt mẫu thực phẩm cần lấy hơn 3 lần.Đồng thời, cần thực hiện lấy mẫu phân tán đa điểm trên bề mặt mẫu.

3. Lấy mẫu nước thải: Căn cứ vào sự phân bố hệ thống thoát nước trên thị trường, chọn 2-3 vị trí lấy mẫu nước thải, tập trung vào các điểm thu gom mạng lưới đường ống nội bộ, phía hạ lưu hướng dòng nước hoặc điểm đấu nối với mạng lưới đường ống đô thị.Để lấy mẫu tăm bông, nhúng tăm bông lấy mẫu vào nước thải để hấp thụ nước thải và rửa trong ống lấy mẫu hơn 3 lần.Để lấy mẫu nước thải, sử dụng chai nhựa polyetylen để lấy mẫu nước thải 30-500 mL;để thu gom nước thải với thể tích lớn hơn 500 mL, có thể sử dụng xô nhựa polyetylen hoặc thiết bị làm giàu mẫu nước đặc biệt tại chỗ.Đồng thời, cần tiến hành lấy mẫu phân tán đa điểm đối với vị trí lấy mẫu nước thải.

4. Mẫu động vật: Đối với động vật sống, có thể sử dụng tăm bông lấy mẫu để thu thập các mẫu bệnh phẩm trên bề mặt cơ thể, bệnh phẩm hầu họng và bệnh phẩm hậu môn, đồng thời cũng có thể thu thập các mẫu phân hoặc dịch tiết và ghi lại tương ứng vào phiếu ghi chép.Đối với các mẫu động vật đã trải qua quá trình lột da, v.v., hãy sử dụng tăm bông để thu thập các mẫu gạc bề mặt cơ thể và khoang cơ thể của chúng.Cần sử dụng dung dịch bảo quản vi-rút trong ống lấy mẫu vi-rút để thấm hoàn toàn vào tăm bông lấy mẫu, sau đó bôi lại bề mặt của mẫu thực phẩm cần lấy.Shabu hơn 3 lần.Đồng thời, cần thực hiện lấy mẫu phân tán đa điểm trên bề mặt mẫu.

5. Các đồ dùng khác: dụng cụ vận chuyển và chăn nuôi động vật như lồng, bể nuôi cá.Đầu tiên, quan sát hoặc hiểu các loại động vật cụ thể được lưu trữ và nhân giống trong vật chứa, đồng thời thu thập các mẫu tăm bông trên thành trong của vật chứa hoặc mẫu chất lỏng của vật chứa.

6. Thu thập các mẫu sol khí ở những khu vực tập trung đông người, khu vực buôn bán địa phương kém thông thoáng, văn phòng và phòng nghỉ ngơi.

II.Dụng cụ lấy mẫu
1. Ống lấy máu
Nếu sau này cần làm xét nghiệm axit nucleic và mẫu chất chống đông máu, nên sử dụng bình hút chân không chứa chất chống đông EDTA để lấy máu;đối với các mẫu huyết thanh, nên sử dụng mạch máu chân không không có chất chống đông máu.

2. Lấy tăm bông lấy mẫu

Nên sử dụng gạc polypropylene thay vì gạc canxi alginate hoặc gạc có cọc gỗ, vì chúng có thể chứa các chất làm bất hoạt một số loại vi-rút và ức chế xét nghiệm PCR.Không thể sử dụng gạc có đầu bông, vì sợi bông có khả năng hấp phụ protein mạnh và không dễ bị rửa giải vào dung dịch bảo quản tiếp theo.

Trong “Thông số kỹ thuật để thu thập hỗn hợp 10 trong 1 và phát hiện axit nucleic của coronavirus mới”, có quy định rõ ràng rằng “tăm bông lấy mẫu phải được làm bằng polyester, nylon và các vật liệu alginate không phải bông và canxi khác, và tay cầm phải được làm bằng vật liệu không phải gỗ.Điểm đứt cách đỉnh đầu tăm bông khoảng 3cm, rất dễ đứt.”

CDC tại Hoa Kỳ cũng đề cập “Chỉ sử dụng gạc sợi tổng hợp có trục nhựa hoặc dây.Không sử dụng miếng gạc canxi alginate hoặc miếng gạc có trục gỗ,vì chúng có thể chứa các chất làm bất hoạt một số loại vi-rút và ức chế xét nghiệm PCR.

Hiện đang được sử dụng rộng rãi là một miếng gạc nylon vô trùng dùng một lần kết hợp với một que nhựa.Tăm bông có tốc độ hấp thụ và giải phóng nước tốt hơn.Theo các vị trí lấy mẫu khác nhau, đầu tăm bông cũng có kích thước và sợi khác nhau.Độ dày.”

3. Giải pháp vận chuyển bảo quản mẫu

Dung dịch bảo quản khử hoạt tính của vi-rút: một lượng thích hợp nồng độ muối guanidine và nhiều thành phần ly giải vi-rút có thể trực tiếp ly giải vi-rút để giải phóng axit nucleic, làm bất hoạt RNase và DNase, đồng thời đảm bảo tính toàn vẹn của axit nucleic, có thể được sử dụng để phát hiện qPCR tiếp theo.Nó không thể được sử dụng để nuôi cấy và phân lập virus.

Dung dịch vận chuyển và bảo quản virus: chứa muối, axit amin, vitamin, glucose và protein cần thiết cho sự sống của virus, có thể duy trì hoạt động của virus.Nó có thể được sử dụng để chiết xuất axit nucleic và phát hiện virus trong tương lai, và nó cũng có thể được sử dụng để nuôi cấy và phân tách virus.

4. Ống bảo quản mẫu và túi đựng mẫu

Ống bảo quản mẫu phải là ống nhựa vô trùng có nắp vặn không hấp phụ axit nucleic.Mỗi ống mẫu phải được đậy bằng một túi mẫu để tránh rò rỉ và nhiễm bẩn mẫu.

III.Các chất cản trở trong mẫu

Các chất cản trở trong thí nghiệm PCR

1. can thiệp nội sinh

Các chất có trong mẫu cơ thể có thể cản trở việc phát hiện các chất khác.

Máu:heme (>1mg/ml), hemin (>0,1ng/μl), triglyceride, IgG, v.v.;

nước tiểu:Urê (20mM);

Ghế đẩu:polysacarit thực vật, cholate;

Mô:protease, collagen;

Sữa: protease, ion canxi;

Thuốc: thuốc kháng sinh, thuốc kháng vi-rút, hormone, v.v.

khác.

2. nhiễu ngoại sinh

Nó đến từ các chất có thể cản trở việc phát hiện các chất khác trong ống nghiệm.Phụ gia mẫu và các chất có thể tiếp xúc trong quá trình thu thập và xử lý mẫu:

vật tư xét nghiệm: gel tách huyết thanh, hộp đựng mẫu và nút cao su, ống thông, dung dịch rửa ống thông, bột găng tay, v.v.

Thuốc kháng đông: heparin (>0,1 U/mL), EDTA (>0,5 mM), v.v.;

Dung môi hữu cơ: isopropanol (>0,1 IU/ml), betaine, dimethyl sulfoxide, formamide, glycerin, PEG, v.v.;

chất khử trùng: rượu (ethanol>1%), andehit, phenol (phenol>0,2%), peroxit, axit mạnh (HCL), kiềm mạnh (NaOH), v.v.;

Chất tẩy rửa:SDS (>0,005%);

Đất: Mùn

thuốc nhuộm: Xanh đậm

khác.

Trong điều kiện lấy mẫu ngoài trời thực tế, chẳng hạn như lấy mẫu môi trường, các mẫu có thể chứa nhiều chất gây nhiễu khác nhau và thành phần của các chất gây nhiễu ở mỗi địa điểm là khác nhau, điều này đòi hỏi phải thực hiện các thí nghiệm can thiệp PCR theo điều kiện địa phương.

IV.Điều kiện bảo quản và vận chuyển mẫu

Các mẫu bệnh phẩm mới lấy phải được gửi đến phòng thí nghiệm trong vòng 2 đến 4 giờ sau khi lấy ở nhiệt độ 2°C đến 8°C.Bảo quản ở 4℃ trong vòng 24h.Các mẫu bệnh phẩm dùng để phân lập vi rút và phát hiện axit nucleic cần được xét nghiệm càng sớm càng tốt.Các mẫu xét nghiệm trong vòng 24 giờ có thể được bảo quản ở 4°C;các mẫu không thể được phát hiện trong vòng 24 giờ nên được bảo quản ở -70°C hoặc thấp hơn (nếu không- Bảo quản ở 70°C trong tủ lạnh ở -20°C).

Bản tóm tắt:Việc thu thập, vận chuyển và bảo quản mẫu được tiêu chuẩn hóa là rất cần thiết cho các thử nghiệm tiếp theo.Kết quả âm tính giả của nhiều xét nghiệm trong phòng thí nghiệm là do việc thu thập, vận chuyển và bảo quản mẫu không đúng cách dẫn đến sự phân hủy axit nucleic của virus.Tuy nhiên, nhiều phòng thí nghiệm vẫn bỏ qua tầm quan trọng của việc lấy mẫu.Tôi hy vọng bài viết này có thể đánh thức sự chú ý của mọi người đối với việc lấy mẫu và thực hiện việc lấy mẫu khoa học và hợp lý hơn!

Sản phẩm liên quan:

Bộ dụng cụ phát hiện axit nucleic biến thể SARS-CoV-2 (I) (Phương pháp thăm dò huỳnh quang PCR đa phản ứng)-Để phát hiện các thể đột biến từ Brazil, Nam Phi và Vương quốc Anh