bạn biết bao nhiêu

Về Nchiết xuất axit nucleic

Sự bắt đầu và kết thúc của axit nucleic tinh khiết

Mọi thứ đều khó khăn khi bắt đầu, axit nucleic tinh khiết là tốt nhất

Bắt đầu các thí nghiệm phân tử, cho các thí nghiệm tiếp theo

Thành công hay thất bại có một tác động quan trọng.

Máy quang phổ UV vết/siêu vết được nhiều nhà nghiên cứu khoa học ưa chuộng vì nó có thể phát hiện nồng độ axit nucleic và dư lượng ion muối và protein một cách đơn giản, nhanh chóng và tiết kiệm.

Như chúng ta đã biết, A260 có nghĩa là giá trị OD hấp thụ axit nucleic, A280 có nghĩa là giá trị OD hấp thụ nồng độ protein, A230 có nghĩa là giá trị OD hấp thụ nồng độ ion muối, vì vậy A260 có thể chuyển đổi nồng độ axit nucleic, A260/280 có nghĩa là dư lượng protein, A260/230 có nghĩa là dư lượng ion muối, nhưng đây chỉ là một quy tắc được các nhà nghiên cứu phát hiện ra dựa trên một số lượng lớn kết quả đo lường, và đó là "thông thường” để tin rằng nó có thể giải thích sự thuần khiết của DNA và RNA đối vớiMột mức độ nhất định.Nó không phải là tiêu chuẩn duy nhất để xác định năng suất và độ tinh khiết của axit nucleic, nó chỉ được sử dụng làm tài liệu tham khảo và không phải là “tiêu chuẩn vàng”.

Hướng dẫn sử dụng Thermo Fisher ND-2000 nhấn mạnh độ tin cậy của kết quả kiểm tra

Nguyên nhân là do kết quả thu được khi sử dụng máy quang phổ UV micro/ultramicro chỉ phản ánh năng suất và độ tinh khiết của axit nucleic từ bên ngoài, còn nhiều yếu tố ảnh hưởng (quang lộ, thể tích mẫu, nồng độ mẫu, giá trị pH, các ion khác ảnh hưởng đến phép đo độ hấp thụ, v.v.), giá trị OD đo được chưa chắc đã chính xác.Đồng thời, do thiếu tính đặc hiệu của vật liệu xác định giá trị độ hấp thụ, DNA sợi đơn, DNA sợi kép, RNA, dNTP và một số protein đều có cực đại hấp thụ ở bước sóng 260nm và nồng độ được xác định bởi riêng A260 không nhất thiết phải là DNA hoặc RNA thực.Sự tập trung, tính toàn vẹn và sự xuống cấp của nó không thể được đánh giá.

Vậy làm thế nào để đánh giá chất lượng axit nucleic tinh khiết của chúng tôi?Ngoài việc sử dụng máy đo quang phổ UV vi mô/siêu vi mô để phát hiện, các phương pháp như điện di trên gel agarose cũng được yêu cầu để hiển thị trực quan độ tinh khiết và tính toàn vẹn của axit nucleic, đồng thời cho biết nồng độ ở một mức độ nhất định.Bằng cách này, năng suất và độ tinh khiết của axit nucleic thu được từ kết quả phát hiện của các phương pháp khác nhau là đáng tin cậy.

So sánh biểu đồ thí nghiệm

DNA bộ gen của các tế bào H1299 được chiết xuất bằng cách sử dụng bộ dụng cụ Trích xuất DNA của công ty A và đã phát hiện thấy sự nhiễm bẩn tạp chất đáng kể, dẫn đến giá trị OD cao

(Giá trị đo OD và điện tâm đồ tương ứng)

chỉ số đánh giá

Có “tiêu chuẩn vàng” để kiểm tra năng suất và chất lượng axit nucleic không?

Theo như chúng tôi biết, không có phương pháp nào đơn giản, nhanh chóng và rẻ tiền.Cho dù đó là máy đo quang phổ, điện di trên gel hay khối phổ, tất cả chúng đều phản ánh nồng độ và độ tinh khiết của axit nucleic trong dung dịch từ các khía cạnh khác nhau và chúng cần được đánh giá bằng cách tham khảo lẫn nhau.

Chỉ số đánh giá tốt nhất luôn làứng dụng thử nghiệm tiếp theo.Nó không ảnh hưởng đến hiệu quả của quá trình sao chép ngược và khuếch đại PCR.Thu được các sản phẩm khuếch đại và giá trị Ct đáng tin cậy, đồng thời thu được trình tự hoàn chỉnh bằng cách giải trình tự là quá trình tách chiết axit nucleic thành công.

Tóm lại, quan điểm của lý thuyết chỉ có tỷ lệ nên bị thách thức bởi quan điểm “sử dụng kết quả thí nghiệm xuôi dòng tốt làm thông số chiết xuất tốt”!

Bộ dụng cụ chiết xuất RNA Foregene DNA được đề xuất để có được độ tinh khiết DNA/RNA cao:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/