Chỉ huy

RNA không mã hóa dài, lncRNA là RNA không mã hóa có chiều dài lớn hơn 200 nucleotide, thường nằm trong khoảng 200-100000 nt.lncRNA điều chỉnh biểu hiện gen ở cấp độ biểu sinh, phiên mã và sau phiên mã, đồng thời tham gia vào quá trình làm im lặng nhiễm sắc thể X, in dấu gen và chỉnh sửa chất nhiễm sắc, kích hoạt phiên mã, can thiệp phiên mã, vận chuyển nhân, điều hòa chu kỳ tế bào, điều hòa biệt hóa tế bào, hiệu ứng bù liều (Dosage offset effect) và nhiều quy trình điều tiết quan trọng khác có liên quan chặt chẽ đến sự xuất hiện, phát triển và phòng ngừa bệnh tật ở người và hiện là một trong những điểm nóng trong lĩnh vực y sinh học.

01  Các loại và đặc điểm của LncRNA

lncRNA được chia thành nhiều loại tùy theo các nguồn hình thành khác nhau, như thể hiện trong hình trên.Có các đặc điểm sau:

1. lncRNA thường dài hơn, với biểu thức động và các phương thức nối khác nhau trong quá trình biệt hóa
2. So với gen mã hóa, lncRNA thường có mức độ biểu hiện thấp hơn
3. Hầu hết các lncRNA đều có tính đặc hiệu biểu hiện không gian và thời gian rõ ràng trong quá trình biệt hóa và phát triển mô
4. Có các biểu hiện đặc trưng trong các khối u và các bệnh khác
5. Các vị trí dưới tế bào của lncRNA rất đa dạng
6. Dãy có độ bảo toàn thấp nhưng hàm có độ bảo toàn nhất định, v.v.

02 Câu hỏi thường gặp về phiên mã ngược LncRNA

Do hàm lượng lncRNA trong tế bào thấp, chiều dài dài và cấu trúc cấp cao, RNA như vậy thường có cấu trúc phức tạp như vòng gốc hoặc kẹp tóc và RT-qPCR dễ gặp vấn đề sao chép ngược không thành công hoặc hiệu quả thấp.

03 Giải pháp sao chép ngược LncRNA

Trong quy tắc trung tâm, quá trình virus RNA sử dụng enzyme phiên mã ngược của chính chúng để tổng hợp DNA bằng cách sử dụng RNA làm khuôn mẫu được gọi là phiên mã ngược.Quá trình sử dụng enzyme phiên mã ngược RNA của virus để tổng hợp khuôn mẫu cDNA trong ống nghiệm được gọi là phiên mã ngược.Các yếu tố chính có trong hệ thống phiên mã ngược: RNA khuôn mẫu, enzyme phiên mã ngược, đoạn mồi và các thành phần khác.

1.ARN mẫu

Ảnh hưởng của mẫu RNA đối với phiên mã ngược được phản ánh trong cấu trúc, độ tinh khiết và tính toàn vẹn của nó.RNA chiết xuất có độ tinh khiết và nguyên vẹn càng cao thì hiệu quả sao chép ngược càng cao và kết quả định lượng tiếp theo càng chính xác.RNA được tinh chế bằng các thuốc thử chiết xuất RNA thường được sử dụng thường chứa dư lượng rượu và muối guanidine, có tác dụng ức chế mạnh đối với hầu hết các enzyme phiên mã ngược.

2. Phiên mã ngược

Enzyme phiên mã ngược có ảnh hưởng quan trọng trong toàn bộ hệ thống phiên mã ngược.Nhiệt độ thích hợp cho enzyme phiên mã ngược được sử dụng trong hầu hết các phòng thí nghiệm thường là 42°C.Trên thực tế, việc mở cấu trúc RNA cấp cao đòi hỏi nhiệt độ cao hơn và các yêu cầu đối với enzyme phiên mã ngược cũng cao hơn.

3.Lót

Mồi phiên mã ngược bao gồm mồi đặc hiệu gen, mồi ngẫu nhiên và mồi Oligo dT.Hầu hết các lncRNA không chứa các đuôi polyA và điều quan trọng là phải khớp đúng các đoạn mồi ngẫu nhiên với Oligo dT.

4.Các thành phần khác

Do RNA đặc biệt dễ bị phân hủy, nên có thể giảm thiểu việc đưa các thành phần vào hệ thống sao chép ngược, điều này có thể ngăn chặn hiệu quả sự xâm nhập của RNase và đảm bảo quá trình sao chép ngược diễn ra suôn sẻ.

Foregenethu được từ mẫu RNA, sao chép ngược thành qPCR

Hộ tống toàn diện quá trình phát hiện lncRNA của bạn

Động vật Tổng số RNA Isự an ủiKit (với cột loại bỏ gDNA)

Tế bào Tổng số RNA Isự an ủiKit (với cột loại bỏ gDNA)

Lnc-RT HeroTM I(Với gDNase)(Super Premix để tổng hợp cDNA chuỗi đầu tiên từ lncRNA)

PCR thời gian thực EasyTM-SYBR Green I

Aưu điểm ofChiết xuất RNA:

Bộ kit sử dụng công nghệ tách chiết RNA thế hệ thứ ba, không cần sử dụng DNase.

11 phút từ các tế bào nuôi cấy trên đĩa 96, 24, 12 và 6 giếng, chiết xuất hiệu quả cao RNA tổng số tế bào không chứa gDNA, có độ tinh khiết cao, chất lượng cao.

Ưu điểm của phiên mã ngược lncRNA:

Một hệ thống phiên mã ngược được phát triển đặc biệt cho LncRNA để nhanh chóng loại bỏ nhiễm DNA bộ gen.

Hệ thống sao chép ngược có độ ổn định nhiệt cao và vẫn có hiệu suất sao chép ngược tốt ở 50°C.

Các mẫu có hàm lượng GC cao và cấu trúc thứ cấp phức tạp có thể được đảo ngược với hiệu quả cao.

Thuận lợiof qPCR:

Khởi động nóng Foregene Taq Polymerase có hiệu suất khuếch đại cao hơn, độ nhạy khuếch đại cao hơn và độ đặc hiệu khuếch đại cao hơn

Real PCR Easy Mix được tối ưu hóa làm cho SYBR Green I có độ nhạy phát hiện cao hơn và cường độ huỳnh quang của nó gấp 3-5 lần so với các sản phẩm tương tự, có thể đáp ứng nhu cầu của các loại thí nghiệm định lượng huỳnh quang khác nhau.