Enzyme Taq khởi động nóng được sử dụng rộng rãi.So với DNA polymerase thông thường, enzyme Taq khởi động nóng có thể tránh được một số sự khuếch đại không đặc hiệu và sự hình thành các chất làm mờ mồi một cách hiệu quả, đồng thời có thể cải thiện hiệu quả tỷ lệ thành công của quá trình khuếch đại gen mục tiêu.Đặc biệt là trong lĩnh vực xét nghiệm di truyền, enzyme Taq khởi động nóng đã được xác định là tiêu chuẩn bắt buộc trong ngành và không nên sử dụng DNA polymerase thông thường.Như có thể thấy ở trên, enzyme Taq khởi động nóng được sử dụng rộng rãi.Hiện nay, trên thị trường trong nước có rất nhiều thương hiệu men khởi động nóng Taq, tuy nhiên những cơ sở cung cấp men khởi động nóng Taq chất lượng cao thì không nhiều.Đối mặt với rất nhiều sản phẩm enzyme Taq khởi động nóng, chúng ta nên chọn như thế nào?

1. Lựa chọn enzyme Taq hot-start có hiệu suất khuếch đại cao

Hiệu suất khuếch đại PCR có liên quan chặt chẽ đến hiệu suất của enzyme Taq.Sau khi hệ thống phản ứng enzyme Taq tốt được tối ưu hóa, hiệu suất khuếch đại trên 95% và phạm vi khuếch đại của lượng mẫu ban đầu rộng.Có thể đạt được sự khuếch đại thỏa đáng khi hàm lượng gen mục tiêu thấp và không dễ bị nhiễm độc khi lượng mẫu cao và thời gian khuếch đại theo cấp số nhân kéo dài.Đối với enzyme Taq có hiệu suất kém, ngay cả khi hệ thống phản ứng đã được tối ưu hóa nhiều lần, hiệu suất khuếch đại vẫn dưới 90%, hình dạng “S” của đường cong khuếch đại không rõ ràng, độ dốc nhỏ và đường cong phẳng.Khi lượng mẫu thấp, nó không thể được khuếch đại và khi lượng mẫu cao, hiệu ứng khuếch đại không lý tưởng.Do đó, việc lựa chọn DNA polymerase có hiệu suất khuếch đại cao là rất quan trọng đối với sự thành công của PCR và qPCR.

2. Chọn enzyme Taq khởi động nóng với năng lượng enzyme mạnh

Sức mạnh enzyme của enzyme Taq có liên quan đến hiệu quả khuếch đại.Nói chung, sức mạnh enzyme của enzyme Taq khởi động nóng càng mạnh thì thời gian khuếch đại PCR theo cấp số nhân càng dài, đường cong 'hình chữ S' điển hình hơn, giá trị tín hiệu huỳnh quang càng cao và càng phù hợp để phát hiện PCR ghép kênh.Các DNA polymerase thương hiệu có sức mạnh enzyme yếu thường chỉ có thể hỗ trợ các phản ứng 2-plex.Khi thực hiện phản ứng 3-plex, đường cong khuếch đại thấp, giá trị tín hiệu huỳnh quang thấp và không có đường cong khuếch đại điển hình nên rất khó đánh giá kết quả.

3. Chọn enzyme Taq khởi động nóng có độ nhạy cao

Nói chung, DNA polymerase có hiệu suất khuếch đại cao và độ nhạy cao, nhưng cũng có những điểm không nhất quán.Nếu mức độ phong phú của gen mục tiêu của mẫu được khuếch đại thấp, thì nên kiểm tra độ nhạy khuếch đại của enzyme Taq.Phương pháp phát hiện phổ biến nhất là tiến hành pha loãng đoạn plasmid gen mục tiêu theo độ dốc 10 lần hoặc 5 lần, thực hiện phát hiện PCR ở độ pha loãng thấp hơn và chọn enzyme Taq khởi động nóng có độ nhạy phát hiện cao hơn.

Từ những điều trên có thể thấy, các nhà nghiên cứu cần lựa chọn theo yêu cầu thực nghiệm và điều kiện kinh phí của mình.Tốt nhất là thực hiện thí nghiệm khuếch đại pha loãng gradient để phát hiện hiệu quả khuếch đại và độ nhạy của enzyme Taq khởi động nóng.

Một ví dụ về Foregene's Taq DNA polymerase:

Foreasy HS Taq DNA polymerase

Sự miêu tả

Foreasy HS Taq DNA Polymerase là một DNA polymerase được biểu hiện ở vi khuẩn kỹ thuật Escherichia coli bằng công nghệ tái tổ hợp gen.Enzyme này được kết hợp với một chất đệm phản ứng độc đáo, làm cho sản phẩm có tính kháng và tương thích cao, đồng thời có thể sử dụng trực tiếp dịch ly giải mẫu (hệ thống Ly giải Foregene) làm mẫu cho các phản ứng phát hiện.

Ứng dụng

PCR định tính và PCR định lượng phát hiện các tiêu bản đã tinh sạch và các tiêu bản chưa tinh sạch.

Kiểm soát chất lượng

1.Không phát hiện hoạt động nuclease ngoại sinh

2.PCR phương pháp phát hiện DNA bộ gen còn sót lại mà không có vật chủ

3. Nó có thể khuếch đại một cách hiệu quả các gen sao chép đơn trong bộ gen của con người

4. Bảo quản ở nhiệt độ phòng trong một tuần, hoạt động không thay đổi rõ ràng

Chi tiết sản phẩm: https://www.foreivd.com/foreasy-hs-taq-dna-polymerase-product/