Thiết lập SOP thí nghiệm PCR để chuẩn hóa hành vi của nhân viên thí nghiệm.
Người thí nghiệm tuân thủ nghiêm ngặt các quy trình vận hành và giảm thiểu ô nhiễm PCR có thể do yếu tố con người gây ra hoặc ngăn ngừa ô nhiễm xảy ra.Ngoài ra, người thử nghiệm cần có kiến thức và kỹ năng chuyên môn tương ứng, bao gồm thành thạo vận hành thiết bị liên quan, hiểu rõ toàn bộ quy trình làm việc, nắm vững phương pháp xử lý ô nhiễm và phương pháp kiểm soát chất lượng phòng thí nghiệm, đồng thời có thể diễn giải chính xác kết quả thử nghiệm.
Thành lập phòng xét nghiệm PCR tiêu chuẩn.
Phòng thí nghiệm PCR về nguyên tắc được chia thành bốn khu vực, đó là khu vực chuẩn bị thuốc thử, khu vực xử lý mẫu, khu vực khuếch đại và khu vực phân tích sản phẩm khuếch đại.Hai khu vực đầu tiên là khu vực tiền khuếch đại và hai khu vực cuối cùng là khu vực hậu khuếch đại.Vùng tiền khuếch đại và vùng hậu khuếch đại phải được tách biệt hoàn toàn.Vật liệu thí nghiệm, thuốc thử, giấy ghi, bút, vật liệu làm sạch, v.v. chỉ có thể chảy từ khu vực tiền khuếch đại sang khu vực hậu khuếch đại, nghĩa là từ khu vực chuẩn bị thuốc thử → khu vực xử lý mẫu → khu vực khuếch đại → khu vực phân tích sản phẩm khuếch đại và không được chảy ngược lại.Luồng không khí trong phòng thí nghiệm cũng phải chảy từ khu vực trước khuếch đại sang khu vực sau khuếch đại và không chảy ngược lại.Thiết kế phòng thí nghiệm PCR lý tưởng được trình bày dưới đây:
Hình A: Chế độ thiết lập phòng thí nghiệm PCR lý tưởng với áp suất âm trong phòng đệm
Hình B: Chế độ thiết lập phòng thí nghiệm PCR lý tưởng với áp suất dương trong phòng đệm
Các sơ đồ thiết lập phòng thí nghiệm PCR được đưa ra trong Hình A và Hình B phải là chế độ thiết lập lý tưởng hơn và phòng thí nghiệm có điều kiện có thể tham khảo chế độ này để thiết kế.Đối với các phòng thí nghiệm thông thường, nên tách khu vực khuếch đại PCR và khu vực phân tích sản phẩm, đồng thời giảm việc mở nắp ở khu vực chuẩn bị mẫu và khu vực khuếch đại PCR càng nhiều càng tốt.Ghi nhớ: Sản phẩm, vật tư thí nghiệm trong khu vực phân tích sản phẩm tuyệt đối không được mang sang khu vực chuẩn bị mẫu và khu vực khuếch đại PCR.
Nếu phòng xét nghiệm chỉ thực hiện PCR phát hiện và định danh thì nên sử dụng PCR định lượng huỳnh quang thay cho PCR thông thường.
Kết quả phát hiện PCR định lượng huỳnh quang có thể được thu thập và phân tích bằng tín hiệu huỳnh quang, do đó không cần mở nắp để điện di sau phản ứng, giúp tránh nhiễm bẩn sản phẩm PCR do rò rỉ sản phẩm phản ứng để tạo thành bình xịt.Nếu bạn tăng số lần mở nắp trong bước nạp điện di trên gel, có thể xảy ra nhiễm bẩn sol khí.Nên đẩy mạnh ứng dụng PCR định lượng và thay thế dần PCR định tính.
Hệ thống ô nhiễm sản phẩm chống PCR UNG được sử dụng cho phản ứng PCR.
Hệ thống sử dụng dUTP thay vì dTTP.Sau phản ứng PCR, tất cả các sản phẩm PCR (các đoạn DNA) được kết hợp với dUTP;trong vòng phản ứng PCR tiếp theo, enzyme UNG được thêm vào hệ thống được ủ ở 37°C trong 5 phút trước khi PCR, có thể phân hủy cụ thể tất cả các đoạn DNA chứa dUTP, sau đó thực hiện phản ứng PCR.Điều này có thể loại bỏ hoàn toàn ô nhiễm khí dung do các sản phẩm PCR gây ra.Hiệu quả được thể hiện trong hình dưới đây:
Lưu ý: Đối với dòng PCR trực tiếp, bạn có thể chọn dòng sản phẩm của hệ thống chống nhiễm sản phẩm PCR của ForegeneGợi ý
Đối với các phòng thí nghiệm tiến hành thử nghiệm kiểu gen quy mô lớn, nên sử dụng hệ thống ô nhiễm sản phẩm chống PCR UNG để thử nghiệm thuốc thử bên cạnh việc xây dựng các phòng thí nghiệm hợp lý.
Nhắc nhở: Việc sử dụng hệ thống này không thể loại bỏ sự nhiễm bẩn sản phẩm PCR đã gây ra.Do đó, hệ thống UNG nên được sử dụng khi bắt đầu xét nghiệm liên quan và hệ thống UNG nên được sử dụng để khuếch đại PCR, để tránh nhiễm bẩn các sản phẩm PCR Dương tính giả.
Nên sử dụng hệ thống Direct PCR-UNG của Foregene khi tiến hành xét nghiệm trên diện rộng như:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Bộ kit PCR trực tiếp hạt giống cây trồng-UNG；
Bộ kit PCR trực tiếp mô động vật-UNG；
Bộ kit PCR trực tiếp đuôi chuột-UNG；
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG。
Loạt bộ dụng cụ này từ Foregenekhông chỉ có thể thực hiện phát hiện PCR một cách nhanh chóng và trên quy mô lớn mà còn có thể ngăn ngừa và kiểm soát hiệu quả sự nhiễm bẩn của sản phẩm PCR.
Thời gian đăng: 19-03-2021
