Đặc điểm nổi bật của phản ứng PCR là khả năng khuếch đại lớn và độ nhạy cực cao.Để cải thiện hiệu suất PCR và hiệu quả phát hiện, chúng tôi cam kết cải thiện khả năng khuếch đại PCR và độ nhạy phát hiện, nhưng vấn đề đau đầu là trong quá trình thử nghiệm.Dương tính giả thường xảy ra và một lượng rất nhỏ nhiễm chéo mẫu hoặc nhiễm sản phẩm PCR có thể gây ra dương tính giả trong thử nghiệm.
Năm loại ô nhiễm sản phẩm PCR
Có nhiều nguyên nhân gây nhiễm bẩn PCR, có thể tạm chia thành các loại sau:
Nhiễm bẩn mẫu bệnh phẩm chủ yếu là do dụng cụ lấy bệnh phẩm bị nhiễm bẩn, hoặc khi đặt bệnh phẩm bị rò rỉ ra ngoài dụng cụ đựng do niêm phong lỏng lẻo, hoặc bệnh phẩm bị dính bên ngoài dụng cụ đựng gây lây nhiễm chéo;Nhiễm bẩn dẫn đến nhiễm bẩn giữa các mẫu;một số mẫu vi sinh vật, đặc biệt là vi-rút, có thể lây lan bằng bình xịt hoặc tạo thành bình xịt, dẫn đến lây nhiễm lẫn nhau.
Lý do chính là trong quá trình chuẩn bị thuốc thử PCR, súng mẫu, hộp đựng, nước cất hai lần và các dung dịch khác bị nhiễm mẫu axit nucleic PCR.
Trong các phòng thí nghiệm sinh học phân tử và một số phòng thí nghiệm sử dụng plasmid nhân bản làm đối chứng dương tính, vấn đề nhiễm plasmid nhân bản cũng rất phổ biến.Do hàm lượng plasmid nhân bản trong một đơn vị thể tích khá cao, đồng thời cần nhiều dụng cụ và thuốc thử hơn trong quá trình tinh sạch, đồng thời plasmid trong tế bào sống rất dễ bị nhiễm bẩn do khả năng sinh trưởng và sinh sản mạnh mẽ của tế bào sống.
Sự nhiễm bẩn của các sản phẩm khuếch đại là vấn đề nhiễm bẩn phổ biến nhất trong các phản ứng PCR.Vì số lượng bản sao của sản phẩm PCR lớn (thường là 1013 bản sao/ml), cao hơn nhiều so với giới hạn số lượng bản sao phát hiện PCR, nên một lượng rất nhỏ sản phẩm PCR bị nhiễm bẩn có thể gây ra dương tính giả.
Ô nhiễm sol khí là dạng ô nhiễm có khả năng xảy ra nhất đối với các sản phẩm PCR và đây cũng là dạng dễ bị bỏ qua nhất.Nó được hình thành do ma sát giữa bề mặt chất lỏng và không khí.Nói chung, ô nhiễm sol khí có thể hình thành khi mở nắp, khi hút mẫu hoặc thậm chí khi lắc mạnh ống phản ứng.Theo tính toán, một hạt aerosol có thể chứa 48.000 bản sao, vì vậy ô nhiễm do nó gây ra là vấn đề đáng được quan tâm đặc biệt.
Đặc biệt, các phòng xét nghiệm thường sử dụng cùng một cặp mồi để kiểm tra một gen nào đó.Theo thời gian, một lượng lớn sản phẩm PCR bị nhiễm bẩn sẽ xảy ra trong không gian phòng thí nghiệm.Một khi ô nhiễm như vậy xảy ra, rất khó để loại bỏ nó trong một thời gian ngắn.
Đối với ba loại ô nhiễm đầu tiên, chúng ta có thể sử dụng các biện pháp hiệu quả để tránh, nhưng ô nhiễm do sản phẩm PCR gây ra rất khó ngăn chặn, đặc biệt là việc xây dựng các phòng xét nghiệm PCR không đạt tiêu chuẩn.Trong quy trình PCR, khi đầu pipet hút và thổi chất lỏng, đồng thời mở nắp ống PCR, sẽ tạo thành một khí dung.Các phân tử DNA được mang theo bởi bình xịt (một bình xịt có thể mang hàng chục nghìn DNA) rất khó bị loại bỏ vì chúng lơ lửng trong không khí.Khi vòng thử nghiệm PCR tiếp theo được thực hiện, chắc chắn sẽ xảy ra dương tính giả.
Như thể hiện trong hình bên dưới, đối chứng âm cũng khuếch đại phạm vi quan tâm tương ứng:
Phần đầu tiên của vấn đề ô nhiễm PCR và phòng ngừa này được giới thiệu ở đây.Số tiếp theo sẽ mang đến cho bạn phần thứ hai "Phòng chống nhiễm bẩn sản phẩm PCR", hãy chú ý theo dõi!
Thời gian đăng bài: Jul-25-2017
