Phân tích sau đây về các vấn đề có thể xảy ra trongmiệngtăm bông/FTA card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

Cột thanh lọc bị tắc

Trong bộ này, trong hoạt động chiết xuất DNA bộ gen, cột tinh chế được hấp phụ trực tiếp trên hỗn hợp phân giải enzyme mẫu mà không cần bước ly tâm và cột tinh chế có thể bị chặn do quá trình enzyme hóa không hoàn toàn và độ nhớt cao của mẫu.

Các nguyên nhân có thể sau đây là như sau:

1. Quá trình tiêu hóa mẫu mô không hoàn toàn bằng enzym.

Khuyến nghị: Thời gian xử lý mẫu của Foregene Protease có thể được kéo dài một cách thích hợp hoặc có thể lấy phần nổi phía trên sau khi ly tâm ở tốc độ 12.000 vòng/phút (~13.400× g) trong 5 phút.

2. Sử dụng quá nhiều mẫu mô hoặc mô lớn.

Khuyến nghị: Tốt nhất là không nên vượt quá 1miệng tăm bông trong mẫu;nếu mẫu quá lớn thì tăng liều lượng Buffer ST1, Foregene Protease, buffer ST2 cho phù hợp.

3. Độ nhớt của mẫu quá cao.

Khuyến nghị: Các mẫu có thể được pha loãng thích hợp với 10 mM Tris-HCl trước khi chiết xuất DNA bộ gen.

4. Các mảnh thẻ máu đã bị hút.

Khuyến nghị: Thời gian ly tâm tạm thời của bước 6 của quá trình trích xuất bộ gen của vết máu (Thẻ FTA) có thể được kéo dài một cách thích hợp.

Năng suất thấp hoặc không có DNA

Thường có nhiều yếu tố ảnh hưởng đến sản lượng DNA bộ gen, bao gồm nguồn gốc mẫu, điều kiện bảo quản mẫu, chuẩn bị mẫu, thao tác, v.v.

DNA bộ gen không thể thu được trong quá trình chiết xuất

Các nguyên nhân có thể như sau:

1. Bảo quản mẫu không đúng cách hoặc bảo quản quá lâu dẫn đến DNA bộ gen bị phân hủy.

Khuyến nghị: Tốt nhất nên lấy mẫu gạc trong miệng mới và không nên sử dụng gạc được bảo quản cho các hoạt động chiết xuất DNA bộ gen;mẫu vết máu phải đảm bảo chất lượng đạt tiêu chuẩn và thời gian bảo quản không quá lâu.

2. Việc sử dụng quá ít mô có thể dẫn đến không trích xuất được DNA bộ gen tương ứng.

Khuyến nghị: Thực hiện theobucal hướng dẫn lấy mẫu tăm bông trong hướng dẫn vận hành và lau càng nhiều lần càng tốt để có thể gắn đủ tế bào vào tăm bông miệng để chiết xuất DNA bộ gen;để chiết xuất mẫu vết máu, diện tích cắt vết máu có thể được tăng lên một cách thích hợp.

3. Foregene Protease được bảo quản không đúng cách dẫn đến giảm hoạt tính hoặc mất hoạt tính.

Khuyến nghị: Xác nhận điều kiện bảo quản củaForegene Protease hoặc thay thế bằng một Foregene Protease mới cho phản ứng enzym.

4. Bảo quản kit không đúng cách hoặc thời gian bảo quản quá lâu dẫn đến một số linh kiện trong kit bị hỏng.

Khuyến nghị: Mua một cái mớimiệng DNA tăm bôngsự cách ly kit cho các thủ tục liên quan.

5. Đệm WB không thêm ethanol tuyệt đối.

Khuyến nghị: Xác nhận rằng dung dịch đệm WB bổ sung đúng thể tích etanol tuyệt đối.

6. Dung dịch rửa giải không được thêm vào màng silicon một cách chính xác.

Khuyến nghị: Thêm 65°Cdung dịch rửa giải được làm ấm trước nhỏ xuống giữa màng silicon và để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để tăng hiệu quả rửa giải.

LDNA bộ gen năng suất cao bị cô lập

Các nguyên nhân có thể sau đây là như sau:

1. Bảo quản mẫu không đúng cách hoặc bảo quản quá lâu dẫn đến DNA bộ gen bị phân hủy.

Khuyến nghị: Tốt nhất là nên lấy mẫu mới từ miếng gạc trong miệng và không nên sử dụng miếng gạc được bảo quản để chiết xuất DNA bộ gen.

2. Nếu lượng mẫu mô quá nhỏ, hàm lượng DNA bộ gen được chiết xuất sẽ ít hơn.

Khuyến nghị: Làm theo hướng dẫn lấy mẫu tăm bông miệng trong hướng dẫn vận hành, lau càng nhiều lần càng tốt để có thể có đủ tế bào dính vào tăm bông miệng để chiết xuất DNA bộ gen.

3. Foregene Protease được bảo quản không đúng cách dẫn đến giảm hoạt tính hoặc mất hoạt tính.

Khuyến nghị: Xác nhận điều kiện bảo quản củathe Foregene Protease hoặc thay thế nó bằng một cái mới Foregene Protease cho phản ứng enzyme.

4. Vấn đề rửa giải.

Khuyến nghị: Sử dụng đệm EB để rửa giải;nếu dùng ddH₂O hoặc chất rửa giải khác, hãy xác nhận rằng độ pH của chất rửa giải nằm trong khoảng 7,0-8,5.

5. Dịch rửa giải không được thêm từng giọt một cách chính xác.

Khuyến nghị: Thêm các giọt dung dịch rửa giải vào giữa màng silicon và để ở nhiệt độ phòng trong 5 phút để tăng hiệu quả rửa giải.

6. Chất lỏng rửa giải tích tụ quá ít.

Khuyến nghị: Sử dụng chất rửa giải để rửa giải DNA bộ gen theo yêu cầu trong hướng dẫn, ít nhấtkhông ít hơn 15μl.

Low tinh khiết of DNA bộ genbị cô lập

Độ tinh khiết DNA bộ gen thấp có thể dẫn đến thất bại hoặc kết quả không đạt yêu cầu của các thí nghiệm tiếp theo, chẳng hạn như: không thể cắt mở enzyme, PCR không thể lấy được đoạn gen quan tâm, v.v.

Các nguyên nhân có thể như sau:

1. Ô nhiễm dị thể, ô nhiễm RNA.

Phân tích: Cột tinh chế không được rửa bằng Buffer PW;cột làm sạch Buffer PW wash không được rửa bằng tốc độ ly tâm chính xác.

Khuyến nghị: Đảm bảo rằng không có kết tủa ở phần nổi phía trên trước khi thêm etanol;đảm bảo rửa cột tinh chế theo hướng dẫn và không thể bỏ qua bước này.

2. Ô nhiễm ion tạp chất.

Phân tích: Cột lọc rửa Buffer WB bị bỏ qua hoặc chỉ được rửa một lần, dẫn đến ô nhiễm ion còn lại.

Khuyến nghị: Đảm bảo rửa Buffer WB 2 lần theo chỉ dẫn để loại bỏ các ion dư càng nhiều càng tốt.

3. Nhiễm enzym RNA.

Phân tích: RNase nước ngoài đã được thêm vào bộ đệm;Hoạt động rửa PW của bộ đệm không chính xác, dẫn đến dư lượng RNase, ảnh hưởng đến các hoạt động thử nghiệm RNA xuôi dòng, chẳng hạn như phiên mã trong ống nghiệm.

Khuyến nghị: Axit nucleic dòng Foregenebiệt lậpbộ dụng cụ có thể loại bỏ RNA mà không cần bổ sung thêm RNase,do đó Buccal Swab/Bộ cách ly DNA thẻ FTAcần't thêm RNase;đảm bảo làm theo hướng dẫn cho cột tinh chế rửa Buffer PW và không thể bỏ qua bước này.

4. Cặn etanol.

Phân tích: Bộ đệm WB không thực hiện ly tâm ống rỗng sau khi rửa cột tinh chế.

Khuyến cáo: Thực hiện đúng thao tác ly tâm ống rỗng theo hướng dẫn.

5. Ô nhiễm tạp chất khác.

Phân tích: Mẫu đã lưu hoặc mẫu đặc biệt không được xử lý trước.

Khuyến nghị: Xử lý kỹ mẫu trước như hướng dẫn.