Tác giả: Wang Xiaoyan, Zhao Eryu

Đơn vị: Bệnh viện Giao Châu, Bệnh viện Đông Phương trực thuộc Đại học Tongji

Hiện tại, loại mẫu chính để phát hiện axit nucleic của mầm bệnh đường hô hấp là ngoáy họng.Có nhiều loại dung dịch bảo quản mẫu thường được sử dụng, tất cả các loại dung dịch này đều cần được bảo quản lạnh hoặc đông lạnh để vận chuyển và bảo quản;Khó kiểm soát toàn bộ quá trình nhiệt độ thấp trong quá trình thu thập và vận chuyển, khó đảm bảo kiểm soát chất lượng trước khi xét nghiệm mẫu^[1-2].

RNase (RNase) là một endonuclease thủy phân RNA, chủ yếu cắt đứt liên kết phosphodiester giữa các nucleotide.Phân tử RNase rất ổn định, có các liên kết disulfide trong cấu trúc và hoạt động của nó không cần sự có mặt của các cation hóa trị hai, vì vậy RNase không dễ bị biến tính và dễ dàng phục hồi ngay cả khi nhiệt độ cao hoặc sử dụng chất biến tính.RNase được chia thành nội sinh và ngoại sinh.Các RNase nội sinh có thể được giải phóng cùng lúc khi các tế bào bị vỡ.Do đó, loại bỏ vai trò của RNase nội sinh là một bước rất quan trọng trong quy trình chiết xuất RNA.RNase ngoại sinh được phân phối rộng rãi.RNase tồn tại trong không khí, da người, tóc và nước bọt, đây là những nguyên nhân quan trọng khiến RNA dễ bị phân hủy^[3].

truy vấn dữ liệu

CANS-CL02-A009 “Áp dụng Nguyên tắc Công nhận Năng lực và Chất lượng Phòng thí nghiệm Y tế trong lĩnh vực Chẩn đoán Phân tử” trong yêu cầu kỹ thuật đề xuất rằng các tiêu chuẩn chất lượng nước phù hợp nên được xây dựng theo ứng dụng;Hộp kín khí dùng một lần:

RNase/Phân loại

(1) RNase A

Ribonuclease A (RNase A), có nguồn gốc từ tuyến tụy của bò, là một endoribonuclease có thể tấn công đặc biệt vào đầu 3′ của dư lượng pyrimidine trên RNA, cắt cytosine hoặc uracil được hình thành bởi các nucleotide liền kề.Liên kết phosphodiester, sản phẩm cuối cùng của phản ứng là nucleotide 3′ pyrimidine và một oligonucleotide với nucleotide 3′ pyrimidine ở cuối.

(2) RNase T1

Ribonuclease T1 (RNase T1) có nguồn gốc từ Aspergillus orjzae, nó đặc biệt hoạt động trên đầu 3′ phosphate của guanine, và vị trí phân cắt nằm giữa 3′ phosphate của guanine và 5′ hydroxyl của các nucleotide liền kề.Sản phẩm cuối cùng của phản ứng là axit 3′guanylic và các đoạn oligonucleotide với axit 3′guanylic ở cuối.

(3) RNase H

Ribonuclease H (RNase H) lần đầu tiên được phát hiện từ mô tuyến ức của bê, và gen mã hóa của nó đã được sao chép vào Escherichia coli.Nó có thể phân hủy cụ thể các chuỗi DNA: RNA trong các chuỗi song công lai RNA, tạo ra các oligonucleotide và mononucleotide có đầu 3′-OH và 5′-monophosphate, nó không thể phân hủy DNA hoặc RNA chuỗi đơn hoặc kép.

RNase

Chức năng và sử dụng

Ribonuclease có thể xúc tác sự phân hủy của axit ribonucleic (RNA) và có thể được tổng hợp nhân tạo.Thuốc mỡ được sử dụng tại chỗ để điều trị chấn thương và đau khớp.Theo báo cáo, ribonuclease có thể thay đổi quá trình trao đổi chất của tế bào vật chủ, ức chế quá trình tổng hợp vi rút, ức chế sự phát triển của vi rút cúm trong ống nghiệm và ức chế sự hình thành của vi rút đậu mùa và vi rút herpes trong phôi gà.Sử dụng lâm sàng 180 mg tiêm bắp hàng ngày ribonuclease, có lợi cho việc điều trị viêm não dịch, ribonuclease có thể xúc tác cho sự thoái hóa của axit ribonucleic (RNA), và hiện có thể được tổng hợp nhân tạo.Thuốc mỡ được sử dụng tại chỗ để điều trị chấn thương và đau khớp.Theo báo cáo, ribonuclease có thể thay đổi quá trình trao đổi chất của tế bào vật chủ, ức chế quá trình tổng hợp vi rút, ức chế sự phát triển của vi rút cúm trong ống nghiệm và ức chế sự hình thành của vi rút đậu mùa và vi rút herpes trong phôi gà.Sử dụng lâm sàng ribonuclease tiêm bắp hàng ngày 180 mg có lợi cho việc điều trị viêm não dịch.

RNase

Định nghĩa chất ức chế

Định nghĩa đơn vị ức chế RNase: Lượng enzyme cần thiết để ức chế 50% hoạt tính của 5ng RNase A là một đơn vị.

Các chất ức chế RNase hoạt động như thế nào

Guanidin isothioxyanat:

Guanidine isothiocyanat là một hợp chất hữu cơ có công thức phân tử C2H6N4S.Chủ yếu được sử dụng trong y học sinh học, thuốc thử hóa học, v.v. Guanidine isothiocyanate là một chất ly giải protein và nó thường được sử dụng làm thành phần chính của dung dịch ly giải trong thuốc thử chẩn đoán phân tử.Nó có thể ly giải mô, phá hủy cấu trúc tế bào và phân tách axit nucleic khỏi nucleoprotein và có khả năng biến tính mạnh đối với RNase.Nó là chất ức chế RNase hiệu quả nhất hiện nay.

TRIzol là thuốc thử chiết xuất RNA tổng số mới có thể chiết xuất trực tiếp RNA tổng số từ tế bào hoặc mô.Nó chứa các chất như phenol và guanidine isothiocyanate, có thể nhanh chóng phá vỡ các tế bào và ức chế các nuclease do tế bào giải phóng.

(Tuy nhiên, guanidine isothiocyanate nguy hiểm cho sức khỏe của các nhà nghiên cứu trong phòng thí nghiệm.)

RNasin:

Axit glycoprotein được chiết xuất từ ​​​​gan chuột hoặc phôi người.Rnasin là chất ức chế không cạnh tranh của RNase, có thể liên kết với nhiều RNase khác nhau để vô hiệu hóa chúng.

(Chi tiết khác: https://www.foreivd.com/foreasy-rnase-inhibitor-product/)

Hnhiệt độ cao:

Nhiệt độ cao cũng là một phương tiện biến tính protein phổ biến.

Dietylpyrocacbonat (DEPC):

DEPC là một chất ức chế RNase mạnh nhưng không hoàn toàn, có thể ức chế hoạt động của RNase bằng cách kết hợp với vòng imidazole của axit amin thuộc nhóm hoạt động của RNase để làm biến tính protein.

Phức hợp vanadyl ribonucleoside:

Một phức hợp được hình thành bởi các ion oxit vanadi và nucleoside, liên kết với RNase dưới dạng các chất chuyển tiếp, có thể ức chế gần như hoàn toàn hoạt động của RNase

khác:

SDS, urê, đất tảo cát, v.v. cũng có tác dụng ức chế nhất định đối với RNase.

Nhận xét của chuyên gia

Kỹ thuật viên trưởng Li Yujie

Giám đốc Khoa Xét nghiệm, Bệnh viện Giao Châu, Bệnh viện Đông Phương trực thuộc Đại học Tongji

Để ngăn chặn sự phân hủy sinh học của RNase ngoại sinh, nên đeo và thay khẩu trang, găng tay và mũ thường xuyên trong quá trình chiết xuất RNA.Tất cả đồ thủy tinh phải được nung trong lò sấy khô ở nhiệt độ 200°C trong hơn 2 giờ.Các vật liệu dùng để nướng, chẳng hạn như nhựa, cần được xử lý bằng nước DEPC, sau đó rửa sạch bằng nước cất.Các thuốc thử hoặc thiết bị được sử dụng để chiết xuất, bảo quản và xác định RNA phải được dành riêng cho RNA và phải thiết lập một khu vực hoạt động RNA độc lập.

người giới thiệu:

[1] Smith-Vaughan HC, Binks MJ, Beissbarth J, et al.Vi khuẩn và vi rút trong vòm họng ngay trước khi khởi phát bệnh nhiễm trùng đường hô hấp dưới cấp tính ở trẻ em Úc bản địa[J].Eur J Clin Microbiol Infect Dis,2018,37 (9): 1785-1794.

[2] Chi nhánh Kiểm soát Nhiễm trùng Bệnh viện của Hiệp hội Y học Dự phòng Trung Quốc.Hướng dẫn thu thập và kiểm tra các mẫu vi sinh vật lâm sàng [J].Tạp chí Nhiễm trùng bệnh viện Trung Quốc, 2018(20):3192-3200.

[3] “Thử nghiệm lâm sàng Tập thử nghiệm sinh học phân tử vạn lý do”