1. Phát hiện độ hấp thụ của dung dịch RNA

Độ hấp thụ ở 280, 320, 230 và 260 nm lần lượt biểu thị các giá trị của axit nucleic, nền (độ đục của dung dịch), nồng độ muối và chất hữu cơ như protein.Nói chung chỉ nhìn vào OD260/OD280 (Tỷ lệ, R).Khi 1,8 ~ 2,0, chúng tôi nghĩ rằng có thể dung nạp được sự nhiễm bẩn protein hoặc chất hữu cơ khác trong RNA, nhưng cần lưu ý rằng khi Tris được sử dụng làm chất đệm để phát hiện độ hấp thụ, giá trị R có thể lớn hơn 2 (nói chung nên <2,2).Khi R <1,8, sự ô nhiễm protein hoặc chất hữu cơ khác trong dung dịch rõ ràng hơn và số phận của RNA có thể được xác định theo nhu cầu.Khi R>2,2 nghĩa là ARN đã bị thủy phân thành axit nuclêic đơn lẻ.
 
2. Mẫu điện di của RNA
Nói chung, gel biến tính được sử dụng cho điện di RNA, nhưng nếu nó chỉ để phát hiện chất lượng của RNA, thì không cần thiết phải làm biến tính gel và có thể sử dụng gel agarose thông thường.Mục đích của điện di là để phát hiện tính toàn vẹn của các dải 28S và 18S và tỷ lệ của chúng, hoặc tính toàn vẹn của vết phết mRNA.Nói chung, nếu dải 28S và 18S sáng, trong và sắc nét (có nghĩa là các cạnh của dải rõ ràng) và độ sáng của 28S hơn gấp đôi so với dải 18S, thì chúng tôi cho rằng chất lượng của RNA là tốt.
Trên đây là hai phương pháp chúng tôi thường sử dụng, nhưng cả hai phương pháp này đều không thể cho chúng ta biết rõ liệu có RNase còn sót lại trong dung dịch RNA hay không.Nếu có một lượng rất nhỏ RNase trong dung dịch, chúng ta khó phát hiện ra bằng phương pháp trên, nhưng hầu hết các phản ứng enzym tiếp theo đều được thực hiện ở nhiệt độ trên 37 độ và trong thời gian dài.Theo cách này, nếu có một lượng rất nhỏ RNase trong dung dịch RNA, thì sẽ có môi trường và thời gian rất phù hợp để phát huy vai trò của chúng trong các thí nghiệm tiếp theo, và tất nhiên lúc này thí nghiệm sẽ lạnh.Dưới đây chúng tôi giới thiệu một phương pháp có thể xác nhận xem có dư lượng RNase trong dung dịch RNA hay không.
 
3. Kiểm tra khả năng giữ nhiệt
Theo nồng độ mẫu, rút ​​hai RNA 1000 ng từ dung dịch RNA và thêm vào ống ly tâm 0,5 ml, đồng thời bổ sung dung dịch đệm Tris pH 7,0 cho đến tổng thể tích là 10 ul, sau đó đậy nắp ống.Đặt một trong số chúng vào bể nước có nhiệt độ không đổi ở 70°C và giữ ấm trong 1 giờ.Phần còn lại được bảo quản trong tủ lạnh -20°C trong 1 giờ.Khi hết thời gian, lấy hai mẫu ra để điện di.Sau khi hoàn thành điện di, hãy so sánh các dải điện di của cả hai.Nếu các dải của cả hai phù hợp hoặc không có sự khác biệt đáng kể (tất nhiên, các dải của chúng cũng đáp ứng các điều kiện trong phương pháp 2), điều đó có nghĩa là không có tạp chất RNase còn sót lại trong dung dịch RNA và chất lượng của RNA là rất tốt.Ngược lại, nếu mẫu được ủ ở 70°C cho thấy sự xuống cấp rõ ràng, điều đó cho thấy có sự nhiễm bẩn RNase trong dung dịch RNA.
 
2 Phương pháp thí nghiệm và kỹ thuật tách chiết RNA
Các vấn đề chúng ta thường gặp khi chiết xuất RNA là: (1) Sản lượng RNA thấp;(2) RNA bị ô nhiễm muối nghiêm trọng;(3) RNA bị ô nhiễm dung môi hữu cơ nghiêm trọng;(4) suy thoái mẫu và các vấn đề khác
 
1. Thuốc thử chiết RNA tổng số thường được sử dụng
Phương pháp guanidine isothiocyanate và phương pháp Trizol là những phương pháp được sử dụng phổ biến nhất để chiết xuất RNA tổng số từ các mô động vật và tế bào động vật.Nó đặc biệt thích hợp cho các mẫu nhỏ và các mô đặc biệt khó chiết xuất, chẳng hạn như chiết xuất RNA tổng số từ da thỏ và mô liên kết của động vật;Ngoài ra, Trizol, như một thuốc thử ly giải đa năng, cũng có thể được sử dụng để chiết xuất các mô thực vật, vi khuẩn, nấm và các mô khác.Đối với các mô thực vật có chứa polysacarit và polyphenol, chẳng hạn như hoa trà, lá trà, hạt cải dầu, v.v., phương pháp CTAB cũng có thể được sử dụng để chiết xuất RNA tổng số.

Là phương pháp thông thường, phương pháp cột kép cũng rất phổ biến do hoạt động ở nhiệt độ bình thường, không cần thêm RNase và an toàn—không có chloroform, phenol và các chất phản ứng hữu cơ khác để chiết xuất.(Sản phẩm khuyến cáo )